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    3’RACE Kit

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    3’RACE Kit

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      • 货号:

        PR6921

      • 保存条件:

        -20℃

      • 保质期:

        1年

      • 供应商:

        百泰克公司

      • 数量:

        10000000

      • 规格:

        0.1mg/20次

      规格: 0.1mg 产品价格: ¥1200
      规格: 20次 产品价格: ¥1200
      3’RACE Kit
       
           
        
      产品说明:
           本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3′末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时,一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域,然后再对扩增出的目的DN**段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDN**段,而RACE法能有效地解决这一问题。Bioteke公司生产的3’RACE试剂盒能够通过已知的cDNA序列,高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3′末端的全长序列。本试剂盒中含有完成3′-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)经过了本公司的特殊改良,反转录性能良好,无RNase H活性,大大增加了反转录性能。进行3′RACE 实验时,首先由Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)将mRNA反转录成cDNA,然后再使用Bioteke LA Taq,以反转录的cDNA为模板,进行套式PCR反应。3′RACE Adaptor作为反转录引物用于合成1st Strand cDNA;使用基因上游外侧特异性引物1和3′RACE Primer 1进行1st PCR反应。如果1st PCR反应未能得到目的产物,再使用基因上游内侧特异性引物2和3′RACE Primer 2进行2nd PCR反应。PCR产物可以直接进行DNA测序或TA克隆。
       
      产品组成:
       
      制品可用于20次反转录反应(约100次3′RACE PCR反应)
      组分名称
      20次
      Reverse Transcriptase M-MLV
      (Rnase H-)(200U、μl)
      20μl
      Rnase inhibitor (40U、μl)
      20μl
      5×M-MLv Buffer
      80μl
      dntp Mixture (10mM each)
      20μl
      3’RACE Adaptor (10μM)
      20μl
      Rnase Free d h2o:
      1ml
      3’RACE Primer 1(10μM)
      200μl
      3’RACE Primer 2(10μM)
      200μl
       
      实验时需要自备的其他试剂:扩增目的DN**段的上游特异性引物;PCR用DNA聚合酶。我们推荐使用Bioteke LA Taq,也可以根据实验需要选用其他PCR用DNA聚合酶。
       
      试剂盒注意事项:
      ◆ 同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液(Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
      ◆ 使用Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)、RNase Inhibitor等酶类时,应轻轻混匀,避免起泡,分取之前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。
       
      问题解答
      1. RT-PCR反应后,无PCR产物或出现Smear,怎么办?
      此时请从提取的RNA样品的纯度和添加量、基因的表达丰度、基因的长度和GC含量、引物的设计情况、参考文献的可信度以及RT-PCR条件的设定等方面加以考虑。
      2. PCR反应时,反转录反应液的使用量使用多少较为合适?
       反转录反应液的使用量可控制在1μl~10μl的范围。
      3. 3′RACE PCR扩增产物经电泳分析后,有时为什么出现多条带现象?
      可能是因为未知序列信息不清楚导致了非特异性扩增; 扩增的基因为多基因家族的成员;mRNA不同的拼接方式造成的。
       
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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