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基因组测序
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上海麒盟生物科技有限公司
实验原理 全基因组重测序,是对基因组序列已知的个体进行基因组测序,并在个体或群体水平上进行差异性分析的方法。与已知序列比对,寻找单核苷酸多态性位点(SNP)、插入缺失位点(InDel,Insertion/Deletion)、结构变异位点(SV,Structure Variation)位点及拷贝数变化(CNV) 。 可以寻找到大量基因差异,实现遗传进化分析及重要性状候选基因的预测。涉及临床医药研究、群体遗传学研究、关联分析、进化分析等众多应用领域。 随着测序成本的大幅度降低以及测序效率的数量级提升,全基因组重测序已经成为研究人类疾病最为快速有效的方法之一。利用illumina 高通量测序平台,将不同插入片段文库和双末端测序相结合,可以高效地挖掘基因序列差异和结构变异等信息,为客户进行疾病研究提供准确依据。技术应用 该物种基因组序列已知,所测序群体之间遗传性差异不大(>99% 相似度),在已经完成的全基因组测序及其基因功能注释的基础上,采用全基因组鸟枪法(WGS)对DNA 插入片段进行双末端测序。实验流程
实验结果:1. 数据产出统计基因组单碱基深度分布及覆盖度分析。2. 一致性序列组装根据与参考基因组序列的比对结果,利用贝叶斯统计模型检测出测序个体基因组中每个碱基位点最大可能性的基因型,并组装出该个体基因组的一致序列。3.SNP检测及在基因组的分布在全基因组一致性序列的基础上,从中提取全基因组中所有的潜在多态性位点,再根据质量值、深度、重复性等因素做进一步的过滤筛选,最终得到高可信度的SNP数据集。根据已有的基因集对检测到得变异进行注释。4.InDel检测及在基因组的分布使用测序个体的短序列与参考基因组进行Paired-End比对,将比对结果进行聚类分析,并结合Paired-End关系检测可信的short InDel。在检测过程中,gap的长度为1~3个碱基。对于每个InDel的检测,至少需要3个双末端序列的支持。5.结构变异检测及在基因组中的分布利用测序个体序列与参考基因组序列进行比对,检测全基因组水平的结构变异,目前能够检测到得结构变异类型主要有缺失、插入、复制、倒位、易位等,并根据已有的基因集对检测到得变异进行注释。
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