紧密连接蛋白1放免试剂盒说明书
CLAUDIN-1(HY-10261) RIA KIT
紧密连接蛋白(claudin)属于一个多基因家族,到目前为止,已有24种claudin成员被发现。紧密连接蛋白-1(Claudin-1)是其蛋白家族的一个成员,是一种完整的膜蛋白,分子量为23kDa,有4个疏水的跨膜区,两个细胞外环形结构和位于胞质中的羧基端、氨基端。紧密连接具有将上皮细胞联合成整体的机械作用,加强细胞间的连接,使细胞不易受破坏。炎症介质、细菌、病毒、过敏原及基因突变等原因引起claudin及其结合的蛋白结构改变,使紧密连接破坏,屏障功能受损,组织渗透性提高,导致多种疾病的发生,如过敏性疾病、遗传性疾病及先天性疾病和感染性疾病等。
测定原理:本药盒应用放射免疫分析方法测定。根据竞争机制原理,125I-CLAUDIN-1与抗体的结合量与标准或样品中的CLAUDIN-1的含量呈一定函数关系。用免疫分离剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,通过数据处理可求出样品中CLAUDIN-1的浓度值。
药盒应用:
用于骨代谢的研究
紧密连接蛋白1放免试剂盒说明书药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1、 缓冲液(PBS)1瓶。
2、 PR分离剂(第二抗体)
3、 CLAUDIN-1抗体1瓶:用前充分摇匀
4、125I- CLAUDIN-1标记 1瓶:
5、CLAUDIN-1标准品6瓶,浓度为3.91、7.81、15.625、31.25、62.5、125pg/ml
测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
CLAUDIN-1 RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品
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缓 冲 液 —— 100 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- CLAUDIN-1 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温15分钟, 3500 转/分 4℃离心20分钟,吸弃上清液,测定沉淀cpm数。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值, 或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
注意事项:
本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
紧密连接蛋白1放免试剂盒说明书本试剂盒主要技术指标:
1. NSB:10%
2. 灵敏度:<20pg/ml
3. 标准曲线范围:0~6400pg/ml
4. 批内变异系数:CVw<9.3 %。
5. 批间变异系数:CVw < 10.4% 。
6. 正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
7.5±3.56pg/ml(n=25)。
本次药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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