环磷酸乌苷放免试剂盒操作说明书
CGMP(HY-10154) RIA KIT
一、 药物供应试验
1.BSA 1瓶(用于配制0.2%BSA的醋酸缓冲液):溶于 25 毫升50mM PH 4.75
的醋酸缓冲液(配法见后)
2.乙酰化剂试剂:使用前将三乙胺和醋酐混匀即可(三乙胺和醋酐各一瓶)
3.125I- CGMP1瓶:使用时用50 mM醋酸缓冲液 10 毫升稀释标记品(约2万CPM左右/0.1ml).
4. CGMP标准1瓶:取 100 微升,用 5.37 毫升50 mM醋酸缓冲液稀释为2pmol/0.1ml,然后倍比稀释成8个浓度点:1、0.5、0.25、0.125、0.063、0.031、0.016、0.008pmol/0.1ml
(B1~B8)。
5. CGMP抗血清一瓶:使用时用含0.2%BSA的醋酸缓冲液16 毫升溶解
6.羊抗兔IgG血清1瓶,每瓶用10ml生理盐水溶解即可,4℃保存。
7.正常兔血清1ml,用10ml生理盐水溶解即可4℃保存。
二、环磷酸鸟苷 CGMP操 作
CGMP RIA 加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB B0 S1~S8 样 品
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醋醋缓冲液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
乙酰化试剂 —— 5 5 5 5
抗 血 清 —— —— 100 100 100
125I-CGMP 100 100 100 100 100
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充分混匀,4℃ 过夜。
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正常兔血清 100 100 100 100 100
羊抗兔IgG 100 100 100 100 100
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充分混匀,4℃ 过夜。
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摇匀,室温放置2~3h, 3000rpm离心15分钟,吸去上清,在γ计数器上测定沉淀CPM数。
三、计算
NSB为非特异结合管,标准曲线及样本测得值均需减去NSB值,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或由γ计数器预先编制得程序,直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。或从EXEL表格中的直线回归方法计算。所得结果乘以稀释倍数即可。
四、环磷酸鸟苷 CGMP样品处理
1、需配试剂
1) EDTA抗凝剂。取9.3克EDTA二钠盐加入1mol/L NaOH溶液25ml,溶解后加水到50ml.。
2) 50mMPH4.75醋酸缓冲液,(含4mM EDTA):取27.22克NaAc . 3H20溶于1000ml蒸馏水,即为0.2M NaAc,用冰醋酸配制0.2M醋酸,然后取410毫升0.2M HAC和590毫升0.2M NaAc混匀,测PH值调到PH 4.75,然后每1000毫升溶液加入5.95克 EDTA 二钠盐溶解即可.此溶液为200 Mm pH 4.75 的醋酸缓冲液,EDTA为16mM。使用时将该液1:4稀释。(1份该液加3份蒸馏水)即成50Mm Ph4.75醋酸缓冲液,含EDTA 4Mm.
2、血样本处理
1) 取静脉血1~2ml,注入含DETA抗凝剂50ul的试管中,摇匀,一小时内离心4℃,2000rpm离心10min,分离血浆, —20℃保存,严禁反复冻融。
2) 血浆处理:取0.1ml血浆加入2ml无水乙醇,振摇1分钟,静置5分钟,3000转/分离心10分钟。将上清液到入指形管或青霉素小瓶,残渣再加入75%乙醇1ml,匀浆,3000rpm离心10分钟。合并上清液,于60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量,此时稀释倍数为100。结果×100即为pmol/ml.
3、环磷酸鸟苷 CGMP组织样品处理
取组织50毫克左右放入盛有2ml冷的50mM PH4.75醋酸缓冲液的试管内(冰浴),匀浆,加入2ml无水乙醇,混匀,静止5分钟,3500转离心15分钟,将上清液收集在青霉素小瓶内,再用75%乙醇2ml洗沉淀,匀浆分散,混匀,3500转离心15分钟。合并上清液,60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量。
4、对于血、组织样本,不同血样或组织中的CAMP或CGMP含量不同,测试前最好预实验确定样品稀释度。
五、正常人血浆参考值:
CGMP:4.6±0.7pmol/ml
xyB608Hu 【中文名称】:人核受体亚家族3C组成员1(NR3C1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Nuclear Receptor Subfamily 3, Group C, Member 1 (NR3C1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB678Hu 【中文名称】:人淋巴细胞抗原9(LY9)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Lymphocyte Antigen 9 (LY9) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB853Hu 【中文名称】:人基质金属蛋白酶19(MMP19)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 19 (MMP19) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB905Hu 【中文名称】:人白介素7受体(IL7R)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 7 Receptor (IL7R) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB952Hu 【中文名称】:人组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Histone Acetyltransferase 1 (HAT1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC048Hu 【中文名称】:人磷脂酶B(PLB)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Phospholipase B (PLB) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC049Hu 【中文名称】:人磷脂酶D(PLD)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Phospholipase D (PLD) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC077Hu 【中文名称】:人层黏连蛋白α4(LAMα4)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Laminin Alpha 4 (LAMa4) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC080Hu 【中文名称】:人层粘连蛋白β2(LAMβ2)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Laminin Beta 2 (LAMb2) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC097Hu 【中文名称】:人整合素α11(ITGα11)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Integrin Alpha 11 (ITGa11) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC169Hu 【中文名称】:人神经秩蛋白(NRTN)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Neurturin (NRTN) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC206Hu 【中文名称】:人组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Histone Deacetylase 1 (HDAC1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC260Hu 【中文名称】:人融合蛋白(FUS)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Fusion (FUS) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC270Hu 【中文名称】:人7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for 7-Dehydrocholesterol Reductase (DHCR7) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC276Hu 【中文名称】:人氨基酰化酶1(ACY1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Aminoacylase 1 (ACY1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC281Hu 【中文名称】:人腺苷激酶(ADK)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Adenosine Kinase (ADK) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC295Hu 【中文名称】:人无羊膜蛋白(AMN)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Amnionless (AMN) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC304Hu 【中文名称】:人Attractin蛋白(ATRN)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Attractin (ATRN) 【灵敏度】:9.375pg/mL