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类淀粉样蛋白β
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上海信裕
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类淀粉样蛋白β放免说明书
β-AP(HY-10052) RIA KIT β—AP是B淀粉样前体蛋白(APP)的一种异常降解产物,相对分子质量约为4.24KD由(39—43)个氨基酸组成。APP分子是一种广泛存在于全身诸多组织细胞膜上并具有膜受体蛋白样结构的跨膜糖蛋白,分子量约(110—135)KD,有胞外区、跨膜区和胞内区三部分,胞外区约占2/3。一部分在胞外,一部分在跨膜区。JIPP的加工途径主要有两条,一条是在q分泌酶的作用下,水解B—AP的Lys16-Leul7位肽键,生成的两个片段均不沉淀,称为非淀粉样肽原性途径或结构性分泌,这是APP加工的主要途径。另一条是由β、γ分泌酶连续作用,其中β分泌酶水解APP695中596597位肽键,γ分泌酶切割β-AP39 ~44之间的肽键,生成完整的β-AP,这是淀粉样肽源性途径。生成的β-AP主要有β-AP1-42和β-AP1-40两种,其中β-AP1-42更容易沉淀,是老年斑的主要成分。β-AP具有神经毒性,其毒性可以通过直接作用于细胞,增强、放大各种伤害性刺激如低糖、自由基的损伤效应,破坏细胞内钙离子的稳态,使神经元发生死亡。本药盒应用放射免疫分析方法测定。在竞争抑制反应中采用顺序饱和法,对血清样品进行直接测定。药盒主要应用范围: * Alzheimer病的研究 * 血管性痴呆的研究类淀粉样蛋白β药盒组成:(常温运输,4℃保存)1. Β-AP缓冲液1瓶2. Β-AP(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。3. Β-AP标准品6瓶 浓度为0.2、0.5、1、2、5、10 ng/L4. Β-AP抗体 1瓶。5. 125I –Β-AP 1瓶 标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。类淀粉样蛋白β测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: Β-AP RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 —— —— 标 准 品 —— —— —— 100 —— 样 品 —— —— —— —— 100 抗 体 —— —— 100 100 100 125I- Β-AP 100 100 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀4℃ 放置24小时 ———————————————————————————— 分 离 剂 —— 500 500 500 500 ————————————————————————————混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算:以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。类淀粉样蛋白β注意事项: 本月标准品每瓶用 0.5 ml 缓冲液稀释 本月药盒抗体每瓶用 10.5 ml缓冲液稀释 本月药盒标记每瓶用 10.5 ml缓冲液溶解 本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)本试剂盒主要技术指标:1、NSB:<5%。2、灵敏度:<0.02ng/L。3、标准曲线范围:0.2-10ng/L4、批内变异系数:CVw<7.3%; 批间变异系数:CVw < 10% 。5、正常参考值:各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。 0.714±0.158 ng/mL本月药盒参考数据: ————————————————————————————————————————— T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 ————————————————————————————————————————— CPM ————————————————————————————————————————— N/T% B0/T% B/ B0 % —————————————————————————————————————————
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