环磷酸乌苷放免试剂盒操作说明书
CGMP(HY-10154) RIA KIT
一、 药物供应试验
1.BSA 1瓶(用于配制0.2%BSA的醋酸缓冲液):溶于 25 毫升50mM PH 4.75
的醋酸缓冲液(配法见后)
2.乙酰化剂试剂:使用前将三乙胺和醋酐混匀即可(三乙胺和醋酐各一瓶)
3.125I- CGMP1瓶:使用时用50 mM醋酸缓冲液 10 毫升稀释标记品(约2万CPM左右/0.1ml).
4. CGMP标准1瓶:取 100 微升,用 5.37 毫升50 mM醋酸缓冲液稀释为2pmol/0.1ml,然后倍比稀释成8个浓度点:1、0.5、0.25、0.125、0.063、0.031、0.016、0.008pmol/0.1ml
(B1~B8)。
5. CGMP抗血清一瓶:使用时用含0.2%BSA的醋酸缓冲液16 毫升溶解
6.羊抗兔IgG血清1瓶,每瓶用10ml生理盐水溶解即可,4℃保存。
7.正常兔血清1ml,用10ml生理盐水溶解即可4℃保存。
环磷酸乌苷放免试剂盒二、操 作
CGMP RIA 加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB B0 S1~S8 样 品
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醋醋缓冲液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
乙酰化试剂 —— 5 5 5 5
抗 血 清 —— —— 100 100 100
125I-CGMP 100 100 100 100 100
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充分混匀,4℃ 过夜。
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正常兔血清 100 100 100 100 100
羊抗兔IgG 100 100 100 100 100
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充分混匀,4℃ 过夜。
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摇匀,室温放置2~3h, 3000rpm离心15分钟,吸去上清,在γ计数器上测定沉淀CPM数。
环磷酸乌苷放免试剂盒三、计算
NSB为非特异结合管,标准曲线及样本测得值均需减去NSB值,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或由γ计数器预先编制得程序,直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。或从EXEL表格中的直线回归方法计算。所得结果乘以稀释倍数即可。
四、样品处理
1、需配试剂
1) EDTA抗凝剂。取9.3克EDTA二钠盐加入1mol/L NaOH溶液25ml,溶解后加水到50ml.。
2) 50mMPH4.75醋酸缓冲液,(含4mM EDTA):取27.22克NaAc . 3H20溶于1000ml蒸馏水,即为0.2M NaAc,用冰醋酸配制0.2M醋酸,然后取410毫升0.2M HAC和590毫升0.2M NaAc混匀,测PH值调到PH 4.75,然后每1000毫升溶液加入5.95克 EDTA 二钠盐溶解即可.此溶液为200 Mm pH 4.75 的醋酸缓冲液,EDTA为16mM。使用时将该液1:4稀释。(1份该液加3份蒸馏水)即成50Mm Ph4.75醋酸缓冲液,含EDTA 4Mm.
环磷酸乌苷放免试剂盒2、血样本处理
1) 取静脉血1~2ml,注入含DETA抗凝剂50ul的试管中,摇匀,一小时内离心4℃,2000rpm离心10min,分离血浆, —20℃保存,严禁反复冻融。
2) 血浆处理:取0.1ml血浆加入2ml无水乙醇,振摇1分钟,静置5分钟,3000转/分离心10分钟。将上清液到入指形管或青霉素小瓶,残渣再加入75%乙醇1ml,匀浆,3000rpm离心10分钟。合并上清液,于60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量,此时稀释倍数为100。结果×100即为pmol/ml.
3、组织样品处理
取组织50毫克左右放入盛有2ml冷的50mM PH4.75醋酸缓冲液的试管内(冰浴),匀浆,加入2ml无水乙醇,混匀,静止5分钟,3500转离心15分钟,将上清液收集在青霉素小瓶内,再用75%乙醇2ml洗沉淀,匀浆分散,混匀,3500转离心15分钟。合并上清液,60℃烤箱中吹干,残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解,然后取0.1ml测量。
4、对于血、组织样本,不同血样或组织中的CAMP或CGMP含量不同,测试前最好预实验确定样品稀释度。
五、正常人血浆参考值:
CGMP:4.6±0.7pmol/mlxy-E11245 人肌抑素(MSTN)ELISA试剂盒 Human myostatin (MSTN) ELISA kit
xy-E11246 人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子(MLZE)ELISA试剂盒 Additional human melanoma Yansheng Liang leucine zipper nuclear factor (MLZE) ELISA kit
xy-E11247 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒 Human uridine diphosphate glucuronyl transferase enzyme 2 family peptide B4 (UGT2B4) ELISA kit
xy-E11248 人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A(PPP1R1A)ELISA试剂盒 Human protein phosphatase 1 regulatory / suppressor factor subunit 1A (PPP1R1A) ELISA Kit
xy-E11249 人腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)ELISA试剂盒 Human adenosine triphosphate -binding cassette transporter G2 (ABCG2) ELISA kit
xy-E11250 人鸟苷酸解离抑制因子(GDI)ELISA试剂盒 Human guanylate dissociation inhibitor (GDI) ELISA kit
xy-E11251 人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA试剂盒 Human octamer transcription factor (OTF2B) ELISA Kit
xy-E11252 人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA试剂盒 Human octamer transcription factor (OTF2A) ELISA Kit
xy-E11253 人脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA试剂盒 ELISA human deoxyuridine triphosphate (DUTP) Kit
xy-E11254 人协同刺激分子受体(CMR)ELISA试剂盒 Who co-stimulatory receptor (CMR) ELISA kit
xy-E11255 人肽聚糖(PG)ELISA试剂盒 Human peptidoglycan (PG) ELISA Kit
xy-E11256 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA试剂盒 People lipoarabinomannan (LAM) ELISA kit
xy-E11257 人甘露糖(MN)ELISA试剂盒 Human mannose (MN) ELISA Kit
xy-E11258 人甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒 Human mannose receptor (MR) ELISA Kit
xy-E11259 人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒 One unmethylated oligodeoxynucleotide (CpG-ODN) ELISA Kit
xy-E11260 人甲酰甲硫氨酸(fMet)ELISA试剂盒 Human formyl methionine (fMet) ELISA Kit
xy-E11261 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA试剂盒 People ICE protease-activating factor (IRAP) ELISA kit
xy-E11262 人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA试剂盒 Human non- methylated oligonucleotide (NON) ELISA Kit
xy-E11263 人蛋白Z(Protein Z)ELISA试剂盒 Human protein Z (Protein Z) ELISA Kit
xy-E11264 人蛋白S(Protein S)ELISA试剂盒 Human protein S (Protein S) ELISA Kit
xy-E11265 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒 Human soluble vascular endothelial protein C receptor (sEPCR) ELISA kit
xy-E11266 人CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)ELISA试剂盒 CCAAT enhancer binding protein human ε (C / EBPε) ELISA Kit
xy-E11267 人CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA试剂盒 Human CCAAT enhancer binding protein δ (C / EBPδ) ELISA Kit
xy-E11268 人CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)ELISA试剂盒 Human CCAAT enhancer binding protein α (C / EBPα) ELISA Kit