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威斯腾生物
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产品详情

内毒素诱发肝硬化大鼠肝性脑病模型
 
模型制作方法  Wiistar大鼠,体重230-250g,雄性。
(1)肝硬化模型复制:用40%四氯化碳油溶液每个3天进行背部皮下注射,同时辅以低蛋白、低胆碱、高脂肪、高胆固醇饮食。实验第6周时形成早期肝硬化;实验第九周时进入中晚期肝硬化阶段。
(2)小剂量内毒素注射诱发肝性脑病:肝硬化动物于实验第9周时进行腹腔注射一次性小剂量注射大肠杆菌内毒素,注射剂量:300微克/100g体重。注射后1h、2h、3h、4h分别测定大鼠脑电图和观察动物一般行为状态变化,以此判断有无肝性脑病的发生。另设单纯内毒素注射组(正常大鼠腹腔内注射同等剂量的内毒素)、正常组及肝硬化对照组,后两组腹腔内注射同等剂量的无菌生理盐水。所有动物均于同一时间注射,注射前禁食过夜。
 
观测指标与分析:

(1)内毒素注射前后动物症状及电脑图检查;
(2)血浆内毒素、血氨、血浆胰高血糖素含量测定;
(3)血液与脑内谷氨酰胺含量测定。
 
【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
【全国免费热线】:400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】www.cqwestern.com
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
 

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  免疫性肝硬化动物模型   免疫性肝硬化是在各种原因导致慢性肝损伤的过程中,机体免疫调节功能紊乱,在肝小叶汇管区出现免疫复合物沉积,引起血管炎和血管周围炎,进而使肝内静止的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC,即贮脂细胞)激活转变为成纤维细胞。同时,免疫复合物的沉积又使肝内一些免疫细胞激活并释放一系列免疫调节因子和细胞因子,从而刺激胶原的大量增生,引起肝组织发生纤维化.最终导致肝硬化的发生。免疫诱导通常采用异种动物血清、蛋白作为抗原,通过反复注射的方式来建立免疫性肝硬化模型. 近年这类模型中研究较多的主要有以下几种。     1.血吸虫性肝硬化模型(schistosomiasis cirhosis mode1.SCM):通常采用皮下注射曼氏血吸虫尾蚴,亦可经皮肤或水感染。SCM不仅能引起窦前性门静脉高压,且虫卵沿门静脉肝内分支f以汇管区为主)大量沉积,可诱发肝内广泛的肉芽肿性炎症反应及免疫反应,同时促使大量成纤维细胞活化增生,产生过多胶原纤维,最终导致“干线性肝硬化”的形成㈣。SCM 由于其病变特殊、门静脉系统血流动力学改变明显,对于血吸虫病性肝硬化门静脉高压症发病机制、病情转归、外科术式改良以及药物筛选等方面的研究均有重要价值。但由于构建此模型耗时较长,而且在建模过程中,实验人员易受感染、周围环境易受污染,所以近年关于这类模型应用的报道较少。    2.同种,异种血清或蛋白诱导性肝硬化模型:Paronetto等很早就发现免疫反应可引起动物肝损伤,他采用猪、牛、马血清和异种蛋白或捣碎的肝实质等作为抗原反复注射于小鼠,通过免疫反应引起肝损伤,大约10周即可形成肝硬化。其主要机制是异种血清或蛋白抗原进入机体后首先引发免疫应答反应,导致免疫复合物在肝门静脉汇管区大量沉积而引起局部炎性反应,进而刺激胶原的大量增生,最终促使肝组织发生纤维化及硬化 。该CM组织学改变明显、作用稳定,可以从免疫学角度探讨肝病发病机制,并研究巨噬细胞、贮脂细胞及成纤维母细胞等在肝纤维化、肝硬化发生过程中的作用。    【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!【全
 肝内型门静脉高压症动物模型     肝内型门静脉高压模型是临床上最常见的,占95%以上,按病理形态的差异又可分为窦前阻塞、肝窦和窦后阻塞两种。窦前阻塞的常见原因是血吸虫病性肝硬化,肝窦和窦后阻塞的主要病因是各种原因引起的肝炎后肝硬化。可以通过向门静脉内注射血管阻塞物等方法建立。1、门静脉内注射微球制作大鼠们静脉高压模型   分别经大鼠盲肠静脉向门静脉内注入10等份(没份0.15-0.2ml)直径分别为15、25、50及90um的微粒。总注入时间要超过20min,但每次注射要在10-15s内完成。同时检测动物动脉、门静脉及皮髓压力。注射2-5次后,门静脉压达到一个峰值(18.5-22.5mmHg),danzai 30-60s内又逐渐降到一个稳定状态(13.3-15.1mmHg),经6-8次注射,门静脉压力达到最大峰值,门静脉压力再不能进一步升高。每种直径的微粒所致的门静脉压力增高值无统计学差异,组织学检查示肝内大量微粒体,以直径为15um的居多,二直径为90um的微粒体则堵塞在较大的门静脉分支,脾内无微粒,动物肺内有各种大小微粒。  2、门静脉内注射PVA制作犬门静脉高压症模型  其方法是经皮肤穿刺,将套管置入门静脉主干,注入PVA,每次0.1-0.9g,每个1到2周一次,每次由0.1g开始,逐渐加量至门静脉压达到或超过1.96kPa(20cmH2O),并稳定于此水平。3个月后成模,随着肝内门静脉较大分支被阻塞,犬存活率下降。3-4周后,出现门体侧支循环;8个月后,肝成不同程度纤维化,但未出现食管静脉曲张。血管造影示门静脉和总肝血流量分别下降53.15%和17.7%,而肝动脉血流量代偿性增加135.51%。实验动物在1-3个月内可死于出血等并发症。该模型适合于于窦前肝硬化与肝硬化血流动力学改变的研究。   【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!【全国免费热线】:400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】
   四氯化碳(CCl4)诱导性肝硬化模型    四氯化碳是最常用于CM 诱导的化学物质,四氯化碳进入机体后,首先经肝细胞微粒体细胞色素P450激活生成活性三氯甲基,四氯化碳通过攻击肝细胞膜的磷脂引起脂质过氧化从而破坏膜性结构,CC1 一还可与蛋白质共价结合,损害线粒体导致还原性辅酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝内生成减少,进而抑制脂肪酸氧化和三羧酸循环。此外,由于内质网受损可导致脂蛋白合成障碍,使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积,形成脂肪变性。因此,低浓度的CC1 反复应用,可使大鼠的肝组织受到损害-修复-损害的循环破坏作用.最终导致肝纤维化及肝硬化的发生。单纯四绿化碳法:一般采用30%-60%四氯化碳油剂,0.1-0.3ml/100g体重,皮下注射,每周2次,也可以用腹腔注射、灌胃或蒸汽吸入等途径给药。改方法试验周期较长,肝硬化一般在12-15周形成。动物死亡率也较高,通常在30%-40%。降低四氯化碳的浓度,可减少动物死亡率。腹腔注射肝硬化形成相对较快,一般8周即可,但动物死亡率较高。 【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!【全国免费热线】:400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼 

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