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磷酸盐
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12个月
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磷酸基团近红外荧光染料 SunRed是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸的试剂盒,磷酸酶催化的SRP的水解产生可以用633nm激光激发并且发射~660nm的太阳红荧光团。虽然Sun Red很容易在633 nm处激发,红色发射约为660 nm,但SRP在633 nm处的吸收非常小,没有红色发射,使SRP成为最敏感的NIR磷酸酶传感器之一。请不要使用DMSO制备储备溶液,因为它会显着增加分析背景。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的磷酸基团近红外荧光染料 SunRed。
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样品实验方案
简要概述
1.在Tris缓冲液(50μL)中制备并添加10 - 50μMSunRed 磷酸盐2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)3.在室温或37°C孵育30至120分钟4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度(截止640 nm)
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。1.1 SunRed 磷酸盐原液:在无菌水中制备2至10 mM的SunRed 磷酸盐储备液。 注意:应立即使用原液。 注意:不要使用DMSO,ETOH或METH制备储备溶液,因为它会显着增加分析背景。 注意:避光。
2.工作溶液
SunRed 磷酸盐工作溶液(2X):在实验当天,将SunRed 磷酸盐固体溶解在无菌H2O中,或在室温下解冻等份的SunRed 磷酸盐储备溶液。 在100 mM Tris缓冲液或pH 8至9的缓冲液中制备10至50μM的2X工作溶液。建议使用SunRed 磷酸盐终浓度5至25μM测定溶液中的碱性磷酸酶活性。
样品分析
1.在碱性磷酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液,使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液。
2.在所需温度下孵育反应30至120分钟,避光。
3.用荧光板读数器监测Ex / Em = 620 / 630nm处的荧光增加(在640nm处截止)
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