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Trizol(总RNA抽提试剂)

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供应商信息

北京雷根生物技术有限公司
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产品详情

品牌: Leagene
货号: NR0002
保存条件: 4℃ 避光
供应商: LEAGENE
保质期: 12个月
规格: 100ml
Trizol(总RNA提取试剂)
产品简介:
Trizol是一种新型的用于细胞或组织的总RNA提取试剂,Leagene Trizol采用与Invitrogen TRIzol完全相似的原理和方法,其颜色、抽提的方法和步骤与后者完全相同。Leagene Trizol含酚和胍盐等物质,能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶,保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后,溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA,中间层用乙醇沉淀回收DNA,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
Leagene Trizol适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100 mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少。
 
产品组成:
                     编号     
名称
NR0002 Storage
Trizol Reagent  100ml 4℃ 避光
使用说明书 1份
 
 
 
 
 
自备材料:
1、试剂:无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。
2、耗材: RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中,RNase是导致RNA降解的最主要物质,非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase,移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。
3、仪器:低温高速离心机、低温冰箱。
 
操作步骤(仅供参考)
1、 样品准备
⑴贴壁细胞:
①直接裂解:直接在培养瓶/皿中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol,用移液器吹打混匀。
②胰蛋白酶消化:用无菌PBS洗涤细胞后,加入含有0.05~0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无RNase的离心管中,5000~6000g离心5 min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低RNA收获率。 
⑵悬浮细胞:无需清洗细胞,直接5000~6000 g离心5 min,收集细胞。每5×106~107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Trizol。
⑶组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50~100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Trizol体积的10%。研磨要迅速,以1min为佳。
⑷血液:取0.5~1 ml新鲜或冻存的血液,12000g离心5 min,去除血浆,加入1ml Trizol,充分振荡混匀。
2、 核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5~10 min后,充分振荡,反复1~3次),将裂解样品或匀浆液室温放置5~10 min,使核蛋白与核酸完全分离。
3、 样品分层:加入0.2 ml氯仿/1ml Trizol,剧烈振荡15 s,室温放置2~3 min。置于4℃离心机,12000 g离心10~15 min。上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA在上层水相。
4、 沉淀RNA:吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染),加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积Leagene Trizol专用RNA沉淀液,超低温冰箱放置2~3hr,可以大大提高RNA回收率),室温放置15~20 min。12000 g 4℃离心10 min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。
5、 洗涤RNA:加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Trizol洗涤沉淀(或者加入1ml Leagene Trizol专用RNA洗涤液,可以大大提高RNA纯度),室温放置5~10 min,7500g 4℃离心5 min,弃上清。室温干燥5~10 min,不宜过分干燥,否则RNA难以溶解。
6、 溶解RNA:加入30~50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品,沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。
 
分析与定量:
  1. 测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8~2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
  2. 进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。
  3. 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。
 
注意事项:
1、 样品保存:加入Trizol混匀后,样品可在-70℃放置1~2月;RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2~4周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。
  1. Trizol是强腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
  2. Trizol可常温运输,建议保存4℃保存。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
 
有效期:12个月有效。
 
常见问题分析:
常见问题 可能原因
 
 
A260/ A280<1.6
抽提得到的RNA沉淀未完全溶解。
水相中混有有机相,从而存在蛋白质和DNA污染。
RNA样品用水而不是TE溶解。低离子浓度和低pH条件下,A280值会偏高。
样品匀浆时加的Trizol试剂太少,RNA与蛋白质、DNA未能完全分离。
匀浆后样品未在室温放置或者放置时间太短,RNA与核蛋白未完全解离。
 
DNA污染
样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液,致水相减少或pH升高。
样品匀浆时加入的试剂体积太少。如果存在DNA污染,可用DNA清除剂去除。
水相中混有有机相,从而存在蛋白质和DNA污染。
 
RNA产量低
样品裂解或匀浆处理不彻底,RNA没有被完全释放出来。
得到的RNA沉淀未完全溶解。
抽提的RNA中含有RNase。
 
RNA降解
组织或细胞不新鲜,样品没有及时被液氮冻存,导致组织或细胞中的RNA降解。
溶液或离心管未经RNase free处理,RNase的污染导致RNA被降解。
细胞在胰蛋白酶消化时间过长,导致未加Trizol前RNA已经部分降解。
电泳时使用的甲酰胺pH小于3.5,导致RNA发生酸解。
蛋白和多糖污染 水相中混有有机相,从而带有蛋白质和DNA。
样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大,细胞未裂解完全。
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温馨提示:不可用于临床治疗。

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我们所提供的Trizol总RNA提取试剂(RNASure Reagent),和Life Technologies的TRIzol Reagent抽提效果一样!但价格不足TRIzol的40%!抽提方法和步骤一样,不必改变您抽提总RNA的操作习惯!颜色一样,无肉眼可见明显色差。产品质量可靠请放心使用,使用不满意包退包换,可提供正规发票。 现在下单购买,买一送一,提供后续RNA提取实验报告一份,50ml包装奖励50元,100ml包装奖励100元,以充话费或微信转账方式奖励:产品介绍:RNASure Reagent是一种即用型总RNA抽提试剂,可以快速提取人、动物、植物、酵母和细菌等不同组织或细胞的总RNA,对少量的50-100 mg组织和5×106细胞,以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。操作简单可同时处理多个的样品,所有的操作能在一小时内完成。RNASure Reagent含有苯酚、异硫氰酸胍等成分,能在裂解样品时迅速破碎细胞,溶解细胞内含物并抑制细胞释放出的核酸酶,同时保持RNA的完整性。研磨后的组织样品加入RNASureTM Reagent,样品完全匀浆或裂解后,加入CHCl3后离心,样品分成:上层无色含RNA的水样层,白色中间层和下层红色的苯酚-CHCl3有机层。收集上面的水样层,通过异丙醇沉淀来提取RNA,通过乙醇沉淀从中间层和有机层提取DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。抽提的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot Blot、RT-PCR、poly(A)+ selection、In tro translation、RNase protection assay and molecular cloning等实验。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子时,建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。RNASure能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/Agenenode2101
(本产品可和美国ZYMO RESEARCH公司DIRECT-ZOL系列R2050完美结合,此试剂盒需要单独购买) TRIcom Reagent是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞中提取到总RNA的试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层 (红色下层),RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高,不含蛋白质及基因组DNA, 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。此外,在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。本品操作简单快速,所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。运输与保存方 4°C 避光保存。注意事项 需自备氯仿、异丙醇、75%乙醇 (DEPC水配制)、DEPC和DEPC水。(后期纯化步骤也可使用DIRECT-ZOL试剂盒) 戴一次性干净手套;在单独的洁净的区域操作;在操作过程中避免讲话,以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。 请尽量使用RNase free的实验器具,包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0. 1% 的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用,不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。 本产品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗; 样品用TRIcom 匀浆后,如果不即刻加入氯仿进行下游实验,可先于-70℃下冻存,可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀,可于4℃保存1周,-20℃保存1年。 RNA半衰期比较短,易降解,建议comingtechct2001

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