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microRNA表达载体构建

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microRNA表达载体构建

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  • microRNA表达载体构建
    MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控。构建miRNA表达载体,实现microRNAs在细胞中稳定表达,能够弥补瞬时转染持续时间短的不足,miRNA的表达方式通常包括pri-miRNA,pre-miRNA与成熟microRNAs形式。
    百恩维生物有多种表达载体,如真核表达载体、各种病毒表达载体等;可选择各种荧光报告基因,如GFP、eGFP、tdTomato、YEP等。
    百恩维生物提供以下两种miRNA表达方式:(1)pri-miRNA(初级转入产物)的表达形式;(2)pre-miRNA(miRNA前体)的表达形式。 
    客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型(如慢病毒载体),我们完成序列合成,质粒构建。
    技术流程如下:
    1、miRNAs序列分析; 
    2、PCR引物设计及合成; 
    3、PCR扩增pri-miRNA序列或者单链互补引物退火形成pre-miRNA序列; 
    4、将片段克隆至含有CMV强启动子的载体上; 
    5、测序以确保插入序列正确性; 
    6、向客户提交测序结果与实验方法报告单。

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