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    尼龙棉柱的制备?T细胞的分离技术和试剂的探讨

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      尼龙棉柱的制备:将长12-16厘米,内径5-6毫米,壁厚0.2毫米的塑料软管的一端用烘热的钳子钳压成45-55的斜角。称取50mg左右的尼龙棉,用0.2mol/l盐酸浸泡过夜,以大量蒸馏水漂洗晾干。然后细致撕匀,浸泡在盛有Hanks液的平皿中,以小镊子将尼龙棉填塞于塑料软管中,并用细竹签均匀的将尼龙棉加到管底。尼龙棉柱高度6cm,一般可有效滤过20*106-30*106个细胞。加满Hanks液,勿产生气泡。制好后可冰冻保存,用时取出融化。再将塑料软管斜角尖端剪成1-2mm的小切口,使管中原有的Hanks液流出 ,流速为 30滴/分以上,但水滴不成线为宜。反复冲洗,最后一次以预温至37C,含20%小牛血清的RPMI-1640洗柱。
      (2)细胞过柱分离:
      尼龙毛现货 上海甄准生物科技有限公司
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      将0.5ml淋巴细胞悬液(细胞浓度为2*106/ml或更高)加入尼龙棉柱内,平放尼龙棉柱,以细长的滴管伸入柱内近尼龙棉界面,滴加0.2ml预温至37C的含20%小牛血清的RPMI-1640封口,以免尼龙棉干后影响淋巴细胞活性。平置于37C温箱中孵育30分。取出,用预温至37C的上述溶液5-10ml洗柱,再用20-25ml上述溶液充分洗去残留的T细胞。洗下的悬液经2000r/min离心10分后,计数细胞并调整至所需浓度,此即分离的纯T细胞。[最后再用上述液体对尼龙棉柱反复冲洗并从上至下轻轻捏挤,直至挤完柱内残留液体,可使黏附的B细胞洗脱,洗下的悬液经离心后,即可得到纯B细胞。此法简便快速,不需特殊仪器,淋巴细胞活性不受影响,T细胞纯度可达90%以上。
       
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