小鼠IgG-DAB显色试剂盒

小鼠IgG-DAB显色试剂盒

 Western blotting DAB检测试剂盒
货号：SW1010 Western blotting (小鼠IgG)DAB显色试剂盒 
产品内容： 1. 封闭试剂 30g。 2. 10倍浓缩抗体稀释液 50ml。 3. HRP标记二抗， 0.5ml，效价1：500-3000。 4. 20倍DAB浓缩显色液，5mlA+5mlB。
保存：
-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和20倍DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
产品简介：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如**纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
操作步骤：(仅供参考) 常规电泳转膜后: 1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。2) 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。5) 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml抗体稀释液加入10ul HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。7) 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。8) 配制DAB显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB显色液A、DAB显色液B各200ul，混匀，加在膜正
面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。
注意事项： 1. 请根据一抗来源选择试剂盒。2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
相关产品：
D1060 10×电泳转移缓冲液
A1800 抗体稀释液（普通型）
T1081-500 10*TBST
SW3010 膜封闭液
SW3020 膜再生液
PE0010 ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)
SW2010 Western blottingECL化学发光法检测试剂盒