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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
1.5mol/L
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
3mol/L-48 μmol/L
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗 D-LA 单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的 D-LA 结合形成固相抗体复合物。加入 HRP 标记的检测抗体后,形成抗体‑抗原‑酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入 TMB 底物显色,HRP 催化 TMB 转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与 D-LA 含量成正比,酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人D-乳酸(D-LA)ELISA试剂盒
英文名称:Human D-LA ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:3mol/L-48 μmol/L
灵敏度:1.5mol/L
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合 D - 乳酸 (D-LA) 中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的 D-LA 会与包被抗体结合,形成 “固相抗体‑抗原” 复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入 HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别 D-LA 的另一个独立表位,从而形成 “捕获抗体‑D-LA‑检测抗体” 的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入 TMB 底物溶液。HRP 催化 TMB 产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),颜色深浅与样本中 D-LA 浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(μmol/L) | 48.00 | 24.00 | 12.00 | 6.00 | 3.00 | 1.50 | 0.75 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.665 | 1.595 | 0.805 | 0.486 | 0.376 | 0.161 | 0.093 | 0.018 |
| 校正OD值 | 2.648 | 1.577 | 0.787 | 0.468 | 0.358 | 0.143 | 0.075 | 0.000 |

一. 试剂准备
将试剂盒所有组分平衡至室温(20–25℃,≥30min);浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。
标准品用标准品稀释液复溶,梯度稀释,配置系列浓度梯度标准溶液,备用。
二. 实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、样本孔,每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本,封板,37℃恒温孵育 90 min。
洗涤:弃净孔内液体,每孔加满洗涤工作液,静置 30 s,甩干拍净,重复洗涤 5 次。
加酶结合物:每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体,封板混匀,37℃孵育 60 min。
洗涤:重复上述洗涤步骤 5 次,彻底拍干微孔。
显色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液,轻柔混匀,37℃避光显色 15 min。
终止:按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液,轻晃混匀,溶液由蓝转黄。
读数:15 min 内,酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值,拟合标准曲线计算样本含量。
三. 关键质控要点
全程孵育使用专用封板膜,防止液体蒸发、交叉污染。
洗涤充分为实验核心,残留洗液易造成背景偏高、假阳性。
TMB 显色液避光储存,现用现加,严禁接触氧化剂。
加终止液顺序需与显色加样一致,避免局部色差、绿色残留。
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