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文献和实验,不仅用于科学研究,而且广泛的应用于临床分析和疾病诊断。比较而言,二抗在免疫沉淀中的应用相对较少。以下内容是基于对所收集的二抗信息进行统计分析后得出的一些结论,对于您在具体的实验中如何选择最适合的抗体具有借鉴作用。 选择二抗时,您必须考虑到以下因素,如一抗的物种、产生二抗的宿主、一抗的类别或亚类、二抗所耦联的探针类型及二抗的形式(如整个IgG分子,F (ab’) 2片段,或Fab片段)等等。因此选择哪种类型的二抗很大程度上决定于您所使用的一抗是什么,尤其针对种属和类别
DNA聚合酶,限制性内切酶mluI,nheI,sphI,notI均购自GIBCOBRL公司,抗CD3单克隆抗体HIT3a由本所协和科技公司提供,抗Pgp单克隆抗体PHMA02由本室制备。鼠抗E-tag抗体,HRP标记的鼠抗E-tag抗体及抗E-tag亲和层析柱均购自Pharmacia公司。FITC标记的羊抗鼠IgG多抗购自北京中山生物工程公司。其它均为国产分析纯生化试剂。(3)PCR引物P1 5’ CTA GCG CAC GCG TAC GCT GAC ATC GAG CTC ACT CAG TCT
,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2%新鲜小牛血清+0.1%叠氮钠 A、PI缓冲液 :用缓冲液将PI溶解至终浓度为1mg/ml中,于4℃下密封避光保存1个月。 B、PI浓缩液 :用缓冲液将PI溶解至终浓度为500mg/ml,于4℃下密封避光保存。我们已经检测过将PI浓缩液放置数月后,并无观察到染色活性的丢失。 Ⅱ、方法: 将样品细胞按程序描述的方法用FITC标记的单克隆抗体进行单色染色。 A、在最后的洗涤步骤后,将样品细胞悬浮于PI缓冲液中,于4℃下密封避光
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