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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
15.625pg/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
31.25pg/mL-2000pg/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
检测原理:
通过特异性抗大鼠VEGF单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的VEGF结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与VEGF含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:大鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒
英文名称:Rat VEGF ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
检测范围:31.25pg/mL-2000pg/mL
灵敏度:15.625pg/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合大鼠血管内皮生长因子(VEGF)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的VEGF会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别VEGF的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-VEGF-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中VEGFQ。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(pg/mL) | 2000.00 | 1000.00 | 500.00 | 250.00 | 125.00 | 62.50 | 31.25 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.677 | 1.611 | 0.823 | 0.487 | 0.311 | 0.159 | 0.090 | 0.023 |
| 校正OD值 | 2.653 | 1.587 | 0.800 | 0.464 | 0.287 | 0.135 | 0.066 | 0.000 |

操作步骤:
一、试剂准备
所有试剂使用前平衡至室温(18–25℃);
洗涤液按比例稀释(如10×稀释为1×);
标准品用稀释液复溶并进行倍比稀释(如0、0.5、1、2、4、8 ng/mL)。
二、加样
设立标准孔、样本孔和空白孔(仅加稀释液);
每孔加入50 μL标准品或待测样本;
可对血清/血浆样本进行1:2预稀释以减少基质干扰。
三、温育
封板后37℃温育60分钟,使抗原充分结合;
温育期间避免阳光直射。
四、洗涤
弃去孔内液体,每孔注入300–350 μL洗涤液;
静置30秒至1分钟,甩干,重复5次;
拍干微孔板,避免残留液滴影响后续反应。
五、加酶标抗体
每孔加入100 μL生物素化检测抗体;
37℃避光温育60分钟。
六、再次洗涤
同上法洗涤5次,确保彻底清除未结合抗体。
七、加HRP-亲和素
每孔加入100 μL HRP标记亲和素;
37℃避光温育30–60分钟。
八、第三次洗涤
再次洗涤5次,拍干。
九、显色
每孔加入显色剂A和B各50 μL(或TMB单组分90–100 μL);
37℃避光显色15–30分钟,观察颜色变化。
十、终止反应
每孔加入50 μL终止液,轻轻震荡混匀;
溶液颜色由蓝变黄,立即进行测定。
十一、读数与分析
使用酶标仪在450 nm波长下测定OD值;
以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线;
将样本OD值代入方程,计算TPS浓度。
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