ER-Tracker Red (BODIPY™ TR Gli

产品描述

ER-Tracker dyes是一系列细胞膜渗透性的活细胞染料，高度选择性结合内质网（ER）。不同于传统的内质网染料DiOC6(3)，该系列染料极少染色线粒体，且低浓度下染色无细胞毒性。使用提供的优化步骤对细胞染色和甲醛处理后，可以保留部分的活细胞染色特征。

ER-Tracker Red是一种药物的荧光偶联物，即BODIPY™ TR标记的格列苯脲（BODIPY™ TR Glibenclamide）。格列本脲，又名优降糖（Glyburide），是一种磺酰脲类口服降糖药，用来调查胰岛素β细胞活性和胰岛素分泌，以及研究心肌细胞功能和心律失常。格列本脲能够结合内质网上突出的ATP敏感性钾通道（KATP）的磺脲类受体。格列本脲的药理学活性可能影响内质网功能。某些特定细胞上磺脲类受体的可变表达可能引起非内质网标记。BODIPY™ TR是Invitrogen (Molecular Probe)公司开发的BODIPY™荧光染料之一，最大激发/发射波长~587/615nm，光谱特性类似于传统的Texas Red，与检测该染料的标准滤片兼容。

本品为DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞内质网染色，建议工作浓度约为1µM，需根据实际情况做优化调整。按照说明书的标准步骤操作，活细胞染色后用甲醛等固定可保留部分染色效果。

产品特性

1） 分子式：C44H42BClF2N6O7S2

2） 分子量：915.2316

3） 外观：液体

4） Ex/Em：587/615nm (in methanol)

5） 检测滤片：TRITC

保存与运输方法

保存：≤-20ºC避光干燥保存，至少6个月有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 整个染色过程中需注意避光。

2） ER-Tracker Red（1mM）在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

以下实验方案是根据牛肺动脉内皮细胞（BPAE）优化所得，且已验证适用于其他常规细胞系的染色。建议以下步骤仅作起始实验的参考，请根据具体的细胞类型和实际情况来优化标记条件。

1. 试剂准备

ER-Tracker Red以1mM的DMSO储存液形式提供，使用前请将ER-Tracker Red 从冰箱内取出，确保回温至室温或于25℃水浴温育直至完全融解，经短暂离心将所有溶液沉到管底。第一次使用将储存液根据单次用量分装，≤-20ºC避光干燥保存。

2. 细胞染色

2.1 制备染色工作液：将1mM ER-Tracker Red稀释至工作浓度，建议工作浓度~1µM。为了最小化染料过高引起的假象，建议使用能达到实验目的的最低浓度来完成染色。【注意】：在含Ca2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）内进行染色可得到最佳结果。

2.2 细胞染色：对于贴壁细胞，吸除培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养基，并在荧光显微镜下观察细胞。如果细胞需要固定，请跳转到步骤3。

3. 细胞固定

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。

3.2 清洗和观察细胞：固定后，用合适缓冲液清洗2次，每次5min。之后可进一步染色或滴加抗荧光淬灭剂封片后观察。不建议进行透化处理，因用Triton X-100做透化处理会导致荧光信号消失。