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文献和实验中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)是一种胞内水解酶。测定其活性对于某些血液病的诊断、鉴别诊断和疗效观察有重要价值。目前国内推荐的改良Gomori钙钴法(简称改良法),其孵育时间长达4 h,试剂配制繁琐,我们将生物化学中有关磷酸基受体缓冲液的原理应用于NAP染色,即在改良法的基础上,以2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)为缓冲体系,建立一种简便快速染色法(简称快速法),孵育时间只需15 min,报道如下。 一、材料与方法
戈莫理氏染色法 Gomoris staining method
G. Gomori创造的许多组织学的、组织化学的、细胞化学的染色法的总称。 ( 1)碱性磷酸酶检出法( 1939):通过酶作用使基质( pH9.4)中游离的磷酸离子,形成磷酸钙,最后以硫化钴(褐色)的形态被检出。对酶具有特异性,在局部有反应不准确的缺点; ( 2)酸性磷酸酶的检出法( 1950):用 pH4.7的基质,将酶以硫化铅(黑褐色)的形态检出。结果常不一致; ( 3)网状纤维镀银法( 1947);
碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶,同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 以ALP为目标物的检测方法: 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下,以镁离子作为激活剂,能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸,磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙,再与硝酸钴作用形成磷酸钴,经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2%
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