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文献和实验石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。 (2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。 (3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。 3.结果计算: 植物组织中H2O2含量(&mu
颜色,有可能几十秒种就能显色。 5. PBS 的充分清洗。在 TUNEL 反应后和酶标反应后的清洗请严格遵守清洗条件,次数可增加到 5 次,以降低切片的非特异性着色。 6. 内源性 POD 的封闭。对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织,可适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度,可以达到较好的封闭效果,且不影响最终的特异性染色。 三、细胞通透的时间选择 1. 蛋白酶 k 的目的是通透细胞膜和核膜,从而使反应试剂能充分进入细胞核进行反应,提高阳性率。但浓度过高或孵育时间过长容易造成脱片,其作用类似
-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。 OPD氧化后的产物呈橙红色,用酸终止酶反应后,在492nm处有最高吸收峰,灵敏度高,比色方便,是HRP结合物最常用的底物。OPD本身难溶于水,OPD•2HCL为水溶性。曾有报道OPD有致异变性,操作时应予注意。OPD见光易变质,与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定,须现配置现用。在试剂盒中,OPD和H2O2一般分成二组分,OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式,片剂中含有发泡助溶剂,使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲
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