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文献和实验的50ml管中保存于4℃,随后更换新鲜培养液 注:对于pBoBi和pll3.7来说,决定其滴度的关键因素就是包装质粒时的转染效率 8. 收集的细胞上清液经过0.45um一次性滤器过滤,除去细胞碎片 9.将35ml过滤的上清加入到一个高速 离心管 中, 离心管 用培养液平衡并用封口膜封口 10. 4℃,70000g离心2小时后,用 移液管 小心移去上清,加入1ml培养液并用 移液管 小心吹吸大概20下至沉淀溶解
cvn:请大家分析下我的问题:本人用六孔板共转染(pAAV-IRES-hrGFP、pRC、phelper)包装空载体腺相关病毒,转染后48小时在荧光显微镜下看,一个视野内约有80%的绿色荧光。转染后第三天,收病毒。再将病毒原液感染种在六孔板内293细胞,48小时后在荧光显微镜下未见绿色荧光蛋白。上述的过程,本人重复了三次。均未见绿色荧光蛋白。现在本人感到疲惫。请大伙帮忙分析分析。谢谢!本人用脂质体2000转染,方法是:①转染前24小时种板,②转染前一小时换液(用无血清的DMEM或有
一、技术背景: Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力,可高度浓缩等优点,并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1,使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞,通过倍比扩增,富集病毒颗粒,并通过CsCl 梯度离心,透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100%的感染效率。但需要指出的是Adeasy 同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒性问题。 二、所需试剂:1. 293 细胞; 2. 重组好的腺
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