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慢病毒包装技术服务

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慢病毒包装技术服务

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  • 商家诚信度 
  • 入驻年限  9年
  • 深圳市宝安区67区留仙一路高新奇战略新兴产业园1号孵化楼5楼

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  • 提供商: 百恩维生物
    服务名称: 慢病毒包装
    慢病毒技术服务
    慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛,可以有效感染分裂期和静止期细胞,长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。
    百恩维生物(Biowit)提供的慢病毒:
    l 百恩维生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高; 
    l 采用VSV-G包膜,宿主范围更广; 
    l 产生的慢病毒滴度高,可达108~ 1010TU/mL; 
    l 各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等; 
    l 可带有荧光报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记基因(Puromycin、Neomycin、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择; 
    l 3~4周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。

    Biowit各种慢病毒表达载体图谱:(各列举一个载体,如您想了解更多,可以跟我们的技术服务人员联系)

    3个包装质粒图谱:

    Biowit慢病毒包装技术路线:


    服务流程:

    您只需给我们提供详细的基因信息,选定您项目所需的慢病毒载体,我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的慢病毒。
    另外百恩维生物经过鉴定与质量控制:载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等,保证给您提供的病毒正确可靠。
    Biowit部分慢病毒感染细胞实例:


    慢病毒概述
    慢病毒( Lentivirus)属于逆转录病毒科(Retroviridae),为RNA病毒,如人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于对HIV-1的研究最广泛最深入,对其生物学特性最为了解,因此HIV-1来源的慢病毒载体已成为其中的代表。

    图1 HIV-1 RNA结构图
    HIV-1为双链RNA病毒,共有9个基因,如图1所示。gag、pol、env3个基因编码病毒的基本结构,tat、rev为调节基因,vif、vpr、vpu、nef 4个为辅助基因。其中,gag基因编码病毒的核心蛋白,包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白;pol基因编码病毒复制所需的酶,如反转录酶、整合酶、蛋白酶,env基因编码病毒的包膜糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gag、pol、env的表达水平,tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列(LTR),内含复制所需的顺式作用元件,如包装信号元件Ψ。
    第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表,该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代,3’LTR由SV40 polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上,一个表达gag和pol,另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR,和全部5’端非翻译区域,另外还带有rev应答元件(RRE)。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。
    第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进,在包装质粒中删除了HIV的所有辅助基因(vif、vpr、vpu和nef基因)。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。
    第三代慢病毒载体系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。将rev基因单独放在一个包装质粒上。同时又增加了两个安全特性:一是构建自身失活的慢病毒载体,即删除了U3区的3′LTR,使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA;二是去除了tat基因,用异源启动子序列代替,这样原始的HIV-1基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。
    百恩维生物用的就是第三代四质粒包装系统,安全可靠。
    慢病毒优点
    1 宿主范围广  包装病毒时用VSV-G基因代替了原病毒的env基因,宿主范围更广,如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 
    2 感染能力强  慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,能感染绝大多数细胞,对一些难于转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞有较好的感染效率。    3 具有整合能力  慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达,因此可用于构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞株,也可以用于制备转基因动物。 

    相关技术服务:
    稳转细胞株构建
    非整合型慢病毒包装
    腺病毒包装
    腺相关病毒包装
    杆状病毒包装
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