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慢病毒包装技术服务

慢病毒包装技术服务
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供应商信息

深圳市百恩维生物科技有限公司
商家诚信度:
成立时间:2010
入驻丁香通年限:8年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:50%
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产品详情

地区: 深圳
提供商: 百恩维生物
服务名称: 慢病毒包装
慢病毒技术服务
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛,可以有效感染分裂期和静止期细胞,长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。
百恩维生物(Biowit)提供的慢病毒:
l 百恩维生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高; 
l 采用VSV-G包膜,宿主范围更广; 
l 产生的慢病毒滴度高,可达108~ 1010TU/mL; 
l 各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等; 
l 可带有荧光报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记基因(Puromycin、Neomycin、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择; 
l 3~4周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。

Biowit各种慢病毒表达载体图谱:(各列举一个载体,如您想了解更多,可以跟我们的技术服务人员联系)

3个包装质粒图谱:

Biowit慢病毒包装技术路线:


服务流程:

您只需给我们提供详细的基因信息,选定您项目所需的慢病毒载体,我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的慢病毒。
另外百恩维生物经过鉴定与质量控制:载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等,保证给您提供的病毒正确可靠。
Biowit部分慢病毒感染细胞实例:


慢病毒概述
慢病毒( Lentivirus)属于逆转录病毒科(Retroviridae),为RNA病毒,如人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于对HIV-1的研究最广泛最深入,对其生物学特性最为了解,因此HIV-1来源的慢病毒载体已成为其中的代表。

图1 HIV-1 RNA结构图
HIV-1为双链RNA病毒,共有9个基因,如图1所示。gag、pol、env3个基因编码病毒的基本结构,tat、rev为调节基因,vif、vpr、vpu、nef 4个为辅助基因。其中,gag基因编码病毒的核心蛋白,包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白;pol基因编码病毒复制所需的酶,如反转录酶、整合酶、蛋白酶,env基因编码病毒的包膜糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gag、pol、env的表达水平,tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列(LTR),内含复制所需的顺式作用元件,如包装信号元件Ψ。
第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表,该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代,3’LTR由SV40 polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上,一个表达gag和pol,另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR,和全部5’端非翻译区域,另外还带有rev应答元件(RRE)。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。
第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进,在包装质粒中删除了HIV的所有辅助基因(vif、vpr、vpu和nef基因)。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。
第三代慢病毒载体系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。将rev基因单独放在一个包装质粒上。同时又增加了两个安全特性:一是构建自身失活的慢病毒载体,即删除了U3区的3′LTR,使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA;二是去除了tat基因,用异源启动子序列代替,这样原始的HIV-1基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。
百恩维生物用的就是第三代四质粒包装系统,安全可靠。
慢病毒优点
1 宿主范围广  包装病毒时用VSV-G基因代替了原病毒的env基因,宿主范围更广,如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 
2 感染能力强  慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,能感染绝大多数细胞,对一些难于转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞有较好的感染效率。    3 具有整合能力  慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达,因此可用于构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞株,也可以用于制备转基因动物。 

相关技术服务:
稳转细胞株构建
非整合型慢病毒包装
腺病毒包装
腺相关病毒包装
杆状病毒包装

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产品简介:慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体, 属于逆转录病毒科,为 RNA 病毒。区别于一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。基于慢病毒载体设计的 shRNA , 转移到细胞内转录 siRNA 的策略,不但使有效转染的细胞种类增加,而且长期稳定抑制目的基因在细胞中表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型细胞,从而达到良好的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。吉满主要提供高质量的慢病毒(高滴度、高纯度),应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。 过表达慢病毒包装 RNAi 慢病毒包装 miRNA 慢病毒包装 稳定细胞株构建服务技术特点:慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于: 非常难转染的细胞,例如神经元细胞、原代细胞、干细胞、肿瘤细胞等,针对这类细胞慢病毒载体的转染效率接近 100%; 构建稳定表达或者沉默特定基因的单克隆细胞株; 活体动物模型(in vivo)的基因操作; 可调控表达,经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体,可实现只有在特定的外源或内源物质的作用下才能产生表达,从而调控目的基因的定时、定量表达。吉满优势: 先进的慢病毒包装技术 丰富的细胞培养经验 专业的技术服务团队 一流的服务质量其它相关服务: 基因克隆 腺病毒、腺相关病毒 CRISPR/Cas9 服务 报告基因专题CRISPR/Cas9服务CRISPR/Cas9服
慢病毒系统介绍    慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体(RNA类病毒)。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率。     慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂。能够快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 产品优势 操作简便,感染效率高 对分裂期和不分裂期细胞均可感染 可稳定遗传表达 多种现货载体选择
慢病毒Lentivirus 实验原理慢病毒属于逆转录病毒科,名称源自该种病毒长达数年的潜伏期,其中最为人所知的是人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。HIV-1直径约120nm,含两条正链RNA,可有效的进入细胞核中,对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。对以HIV-1为基础进行的慢病毒载体的改造,主要是去除致病基因减少辅助质粒与载体质粒的同源性,最终体现在滴度、生物安全性和外源基因表达效率上的提高,见结构示意图。慢病毒包装系统特点:可通过顺式作用元件将携带的基因运送到细胞核,将要表达的基因序列整合到细胞基因组中,后续可以通过筛选稳转株获得持续稳定的高表达。实验流程 病毒提供规格    客户提供 病毒规格 提供量 赠送阴性对照 实验周期 过表达慢病毒 过表达基因NCBI登陆号及含该基因的质粒载体、测序报告 低滴度10^5-10^6 TU/ml 10 ml 2 ml 2周 高滴度10^7-10^8 TU/ml 1 ml 0.2 ml 3周 干扰慢病毒 待干扰基因的NCBI登陆号及靶点序列信息 低滴度10^5-10^6 TU/ml 10 ml 2 ml 2周 高滴度1-3*10^8TU/ml 1ml 0.2 ml 3周   实验结果展示 
产品简介       慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 整体实验流程 (一) 实验流程(1、2、3为并列步骤)       1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。      2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。      3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。      4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。 (二)流程图   提供产品  产品名称 病毒滴度 规格 赠送阴性对照病毒规格 过表达慢病毒 >10^8 PFU/ml 1ml 1ml(>10^8 PFU/ml) 干扰慢病毒 >10^8 PFU/ml 1ml 1ml(>10^8 PFU/ml) kesciencekescience-001

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