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免疫细胞无动物源培养基

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免疫细胞无动物源培养基

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  • 货号: BW12002
    保存条件: 4度
    供应商: 百恩维生物
    规格: 1000ml
    免疫细胞无动物源培养基

    ★ 产品描述
    免疫细胞无动物源培养基(BW12002)是百恩维生物开发,可用于人免疫细胞临床治疗研究的无动物源培养基,生产过程符合cGMP的标准规范。可用于人类体外组织及细胞培养过程中的应用。
    产品货号 产品规格 贮藏条件 有效期 运输
    BW12002 1000ml 2~8℃避光保存 14个月 冰袋运输

    ★ 产品特点
    1、无动物源培养基,无添加细胞因子。
    2、无异源动物成分,化学成分明确。
    3、 培养性能优越,支持高密度单核细胞培养。

    ★产品组成 
    1、基础培养基          1000ml
    2、ICSFMGS             10ml
    3、庆大/链霉素双抗     10ml

    ★ 产品应用
    1、DC细胞、CIK细胞和NK细胞的长期增殖培养。
    2、PBL细胞和TIL细胞的长期增殖培养。
    3、单核细胞和巨噬细胞的长期增殖培养。
    4、T淋巴细胞的长期增殖培养。

    ★ 操作步骤
    使用方法:
    将产品组成中的ICSFMGS和双抗解冻后,加入基础培养基中混匀使用。
    培养过程: 
    以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则,如需在生物反应器或培养袋中高密度培养,应优化条件来确定最佳的操作步骤。 

    T细胞培养:
    1、准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC),或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序,在37°C的水浴,快速解冻(〈1分钟)冻存的外周血单个核细胞。
    2、用生理盐水洗涤细胞,根据需要也可加入2-5%热灭活的的人自体血浆。
    3、用电子(即Coulter计数器,VI-细胞)或手动的方法(即血球计数仪)给细胞计数。
    4、离心细胞,清除洗涤缓冲液。
    5、培养初期,用含细胞因子(如IL-2)的培养基重悬PBMC,CD3 + T细胞密度保持在大约0.5-1×106/ml,转移细胞到相应的细胞培养容器(培养袋、培养瓶)。随后可应用各种操作激活T细胞,包括添加刺激的抗体或抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小,细胞均可被隔离,激活和扩大。
    6、在37℃,5%CO2的潮湿培养箱中培养细胞,给予并维持细胞在对数期生长所需要的营养。为了保持细胞在对数期的增长,当细胞密度超过1×106/ml时,需要分离传代,维持细胞密度在0.5-1×106/ml(例如,2×106个细胞/ml以上,按1:4比例0.5x106细胞/ml)。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换,建议培养基深度不超过1到1.2厘米。

    单核细胞树突状细胞培养: 
    1、准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC)。 
    2、将外周血单个核细胞铺在培养瓶中,加入适量免疫细胞无动物源培养基(货号BW12002)。 
    3、在37℃,5% CO2的恒温培养箱中孵育2〜3小时。 
    4、弃掉含非贴壁细胞的培养基。 
    5、用生理盐水洗涤贴壁细胞(主要是CD14 +单核细胞)三次。 
    6、添加重组人IL-4和重组人GM-CSF到免疫细胞无动物源培养基, 至终浓度分别为50~100 ng/ml和50 ng/ml,并以此培养基培养贴壁细胞。保持细胞密度在1~3x105细胞/cm2之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。
    7、在37℃,5% CO2的潮湿培养箱中连续孵育5天,建议培养3天左右已添加了IL-4和GM-CSF的免疫细胞无动物源培养基换液,换液过程保留贴壁和不贴壁的所有细胞。
    8、培养6天之后,细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记(细胞CD1a,CD80,CD86,HLA-DR)。 
    9、向培养基中添加1ng/ml的LPS或者50ng/ml的TNF-α诱导的树突状细胞的成熟。

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