NEB M5522 快易无缝克隆预混液

本产品提供以下试剂或组分：

Features

• 灵活的序列设计方案（重组克隆）
• 无需PCR纯化步骤
• 15分钟内快速完成DNA组装
• 组装产物可直接用于转化，或作为 PCR 或 RCA 的模板
• 适用于多种 DNA 改造，包括定点突变
• 对长达 20 kb 的插入片段仍可高效完成转化
  
  

1. 一般说明：
   强烈建议使用我们的在线工具 NEBuilder™ 来设计 PCR 引物，使其在相邻 DNA 片段之间具有重叠序列，以将其组装到克隆载体。
2. 使用说明：
   为确保成功组装以及后续成功转化组装的 DNA，NEB 建议遵循以下做法：
   
   
   • 细胞：感受态细胞的转化效率可能相差几个数量级。观察到的组装效率与用于转化的感受态细胞效率直接相关。
   • 电转化：电转化可以将转化效率提高几个数量级。将快易无缝克隆预混液产品用于电转化时，需要将反应液稀释 3 倍，并取 1 μl 用于转化。
   • DNA：如果快易无缝克隆反应液中所有 PCR 产物的总体积不超过快易无缝克隆反应体积的 20%，无需进行 PCR 产物纯化。PCR 产物体积过多会引入更多 PCR 产物中存在的 PCR 反应缓冲液和未使用的引物，从而降低快易无缝克隆和转化的效率。PCR 产物柱纯化可能会使快易无缝克隆和转化的效率增加 2 – 10 倍，在组装三个或更多 PCR 片段时，或组装长度超过 5 kb 的片段时，强烈建议进行 PCR 产物柱纯化。用于组装的纯化 DNA 可溶于 ddH₂O（推荐使用 Milli-Q® 水或同等纯度的水）、TE 或其它稀释缓冲液。
   • 插入片段：直接将片段组装到克隆载体中时，组装片段的浓度应比载体浓度高至少 2–3 倍。组装三个或更多片段时，建议使用等摩尔比的片段。
   • 生物学特性：一些 DNA 结构，包括反向重复序列和串联重复序列，会被大肠杆菌选择性丢失。大肠杆菌无法耐受某些重组蛋白，因此可能会导致转化效率较低或菌落较小。
3. 检测报告（CoA): 请关注NEB微信号 (NEBiolabs)，通过点击“产品查询”按钮获得CoA文件