外泌体提取试剂盒（细胞上清）PRO版

Exosome isolation kit Plus (for Cell Culture Media)

细胞培养上清外泌体抽提试剂盒

运输和保存方法：室温                                                        有效期：1年

注：本产品只适用于科研用途！

一、产品简介：

外泌体（Exosomes）是一种直径在30-200 nm的微小囊泡，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。目前外泌提取主要有超速离心、试剂盒提取等方法。其中超速离心分离得到外泌体，纯度高，可满足于后续不同实验的需求，但是仪器要求高，周期长，工作量大。

本试剂盒可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，普通的实验室离心机就可以完成，提取的外泌体适用于下游的细胞共培养、电镜、分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

二、操作方法：

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、细胞培养上清样品转移至离心管中，4℃，3000×g 离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、 使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。

2、 向样品中加入1/4 倍样本体积的外泌体抽提试剂，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2-3 h。

3、 取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清，收集富含外泌体的沉淀。

4、 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000×g离心2min，弃上清(注：尽可能吸尽上清液)。

5、 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5mL离心管中(建议每20 mL细胞培养上清用200 μL左右1×PBS重悬)。

6、 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5mL离心管于4℃以12,000×g离心2min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多，可12,000×g,2min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)。

7、 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入纯化柱的上室中，于4℃以3,000×g离心10min，离心后收集纯化柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注：纯化柱不可重复使用)。

8、 纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

三、结果展示

注意事项：

1.       为了确保获得的外泌体是来自于您的细胞，最好使用无外泌体的血清进行培养；

2.       产品只针对细胞培养上清来源的外泌体分离，不适用血清/血浆中外泌体的抽提，如果需要进行血清/血浆的外泌体分离， 请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒；

3.       为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。