品牌：EnkiLife
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3、联系时间：试用活动结束后的 3 天内
4、申请要求：每个实验室只能申请1次
5、其他说明：将试用结果发社交媒体并保留3天以上的用户
企业认证
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- 详细信息
- 申请记录(23)
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 英文名：
No-Blocking Rapid Antibody Diluent
- 保质期：
12个月
- 供应商：
武汉恩玑生命科技有限公司
- 保存条件：
2-8 ℃
- 规格：
100mL/500mL
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥258.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500mL | 产品价格： | ￥999.0 |
产品概述
本品适用于WB实验中一抗及二抗的稀释工作;通过深度优化的配方,提高了抗体结合抗原的效率,使得一抗和二抗在室温下20min即可完成孵育步骤;首次使用本品稀释一抗时,无需封闭步骤,可直接孵育转印膜,从而提高实验效率。
使用本品稀释好的抗体工作液可正常回收3-5次,通常可以在4℃存放6个月以上。本品兼容磷酸化、乙酰化等多种抗体,不含sodium azide等有毒防腐剂。
核心优势
与传统方法的时间对比
|
传统封闭方法 |
使用本产品 |
|
封闭步骤 60分钟 |
封闭步骤 无需封闭 |
|
一抗孵育2小时或过夜 |
一抗孵育 20分钟 |
|
二抗孵育1-2小时 |
二抗孵育 20分钟 |
|
总计: 4小时至过夜 |
总计: 40分钟 |
使用本产品可将整个抗体孵育过程从4小时缩短至仅需40分钟!
产品信息
|
产品名称 |
保存条件 |
规格1 |
规格2 |
|
免封闭快速抗体稀释液 |
2-8℃ |
100mL |
500mL |
|
说明书 |
- |
1pcs |
1pcs |
保存条件:2-8℃保存,有效期1年。
操作流程
- 工作液配制:按照抗体说明书的稀释比例,将一抗或二抗加入到适量本品中混匀(抗体工作液需完全覆盖整膜,推荐使用10mL以上);
- 一抗孵育:将转膜后的NC膜或者PVDF膜放入适量体积的一抗工作液中,置于水平摇床上室温振荡孵育20分钟(首次使用一抗工作液时无需封闭);
- 洗涤:回收一抗工作液,使用TBST洗涤3次,每次洗涤3-5min;
- 二抗孵育:在孵育盒内放入适量体积的二抗工作液,置于水平摇床上室温振荡孵育20分钟;
- 洗涤:回收二抗工作液,使用TBST洗涤3次,每次洗涤3-5min;
- 显影:加入适量体积的ECL发光液,置于仪器中曝光显影。
产品优势
- 高效省时:室温下20min快速完成一抗及二抗的孵育;
- 通用性:通用一抗和二抗,兼容磷酸化、乙酰化等修饰性抗体;
- 免封闭:首次使用本品稀释一抗时无需封闭;
- 可回收:本品稀释后的抗体可回收使用3-5次;
- 安全性:不含sodium azide等有毒防腐剂,使用更安全。
注意事项
- 使用回收的一抗工作液时出现背景偏高,则需在转膜后增加封闭动作;
- 对于低丰度蛋白,建议一抗4℃过夜孵育;
- 本品仅限科研使用。
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申请记录
文献和实验那么如何通过改变抗体稀释液的配方，寻求抗体孵育的最佳条件呢？首先要认清，抗体稀释液没有一个绝对通用的配方；一种抗体一个脾气。其次，抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度，以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前，抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk，BSA和gelatin，似乎很少的样子 。。。可是，你有没有考虑过“复方”？--这下配方无限多了吧。1. 采用milk，BSA和gelatin的单方。3% milk，5% BSA，2.很多情况下单方的浓度很高了，背景问题仍不能
案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时抗体稀释液也不够了，我又重新从博士
不完全：使用正常山羊血清或 1%～5% BSA 封闭 1h。 （5）离子相互作用造成的背景：降低抗体稀释液的离子强度。 （6）切片或细胞过于干燥或孵育温度过高：实验过程中请保持切片处于湿润状态，一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 （7）内源性过氧化物酶残余：适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 （8）样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久：样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4：为什么会出现非特异性染色，如何避免？ （1）抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色：由于本试剂盒使用
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