Flash极速敲除试剂盒

CRISPR KO极速敲除试剂盒通过递送预组装的递送载体、Cas9蛋白与sgRNA复合物（RNP），实现高效、精准的基因敲除，是一款专为科研用户定制研发的即用型基因敲除试剂盒。该产品包含艾迪基因创新研发的 CRISPR RNP 递送载体以及经数千例实战验证过的 Cas 酶，经过特殊处理的递送载体-RNP 复合物能够在哺乳动物细胞中产生高效的基因组编辑。

 

产品组分

产品编号	组分	规格	20T
EDKO-K04-50	递送载体-RNP 复合物	50 μL（足够 5 个 24 孔）	24 孔板，10 μL/孔
EDKO-K04-100	递送载体-RNP 复合物	100 μL（足够 5 个 12 个孔）	12 孔板，20 μL/孔

注意:本产品只提供一体化的递送载体-RNP 复合物，客户需要提供 sgRNA 序列。

 

可选组分

编号	可选项	备注
EDKO-K04-50	递送载体-RNP 复合物	艾迪基因提供 sgRNA 序列设计服务
EDKO-K04-100	递送载体-RNP 复合物	人 B2M 基因 递送载体-RNP 复合物

 

实验步骤

1.细胞培养和铺板（以24孔板为例） 细胞培养至生长旺盛状态，转染前24 h，接种细胞至24孔板（对于贴壁细胞，使转染时细胞汇合度为50%~60%；对于悬浮细胞，使转染时细胞数量为1.2×10⁵~1.6×10⁵）。

请使用生长状态较好的细胞，并确保细胞无细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

 2. 细胞转染 提前将载体-RNP 复合物从 -80℃ 转移至4 ℃ 缓慢解冻，每孔加入10 μL 加入时分多次缓慢加入，加入后轻轻晃动混匀。

对于贴壁细胞的要求：细胞状态好，分布均匀，汇合度为50%~60%，则可直接加入本产品； 

对于悬浮细胞的要求：细胞状态好，加入载体-RNP复合物前需将细胞团轻柔吹散，分散均匀后直接加入本产品。

3. 分析转染细胞 转染48h后，提取所转染细胞的基因组，使用特异性引物扩增靶标区域(扩增子包含sgRNA靶向切割的位置)；

使用TIDE或者ICE等工具进行基因编辑效率分析。 

 

高效编辑结果展示

图 3 HEK293T（B2M）多克隆 ICE 分析结果

 

FAQ

本产品已在多个细胞上验证，RNP系统在转染后4小时内即进入细胞发挥作用，Cas9蛋白在24-48小时降解，通过瞬时高效表达实现编辑，无需持续筛选。