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- Meridian
- MDX025
- 德国
- 2026年04月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
9999
- 英文名：
Low LOD 1-Step RT-qPCR Master Mix
- 保质期：
2年
- 供应商：
北京迈迪安生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
Meridian dUTP 低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液
dUTP 低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液（MDX025) 是一种快速、高度可重复的实时 PCR 主混合物，其采用高度优化的缓冲化学和热启动 DNA 聚合酶设计，可提供出色的结果和非常低的背景，从而实现更高的灵敏度。
dUTP 低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液（MDX025) 包含 Taq DNA 聚合酶、反应缓冲液、dNTP、MgCl 2、稳定剂、PCR 增强剂，以及单独的 RNase 耐受逆转录酶混合物。然而，dNTP 中的 dTTP 已被 dUTP 取代，因此可以添加尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDGase) (MDX054) 来去除背景 PCR 产物污染。这使得低 LOD 一步法 RT-qPCR 成为开发高灵敏度 RT-qPCR 诊断检测的理想选择，例如用于检测血库中极低浓度的 RNA 和 DNA 病毒或移植病毒检测。
产品特点
RNA 和 DNA 病毒的检测限 (LOD) 较低
使用dUTP 低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液以指定浓度 (IU/mL) 对纯化血液病毒提取物进行了 24 次单重 qPCR 检测。单重反应包括 HCV、HIV-1、HIV-2 和细小病毒 B19。扩增曲线结果表明，低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液可用于浓度低至 5 IU/mL 的 RNA 和 DNA 病毒。
产品规格
| 描述 | RT-qPCR 混合物含有 Taq 聚合酶、反应缓冲液、MgCl 2和优化的 dNTP/dUTP 混合物以及单独的逆转录酶/RNase 抑制剂混合物，旨在对高度结构化和极低拷贝数的 RNA 和 DNA 靶标进行严格扩增。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 澄清无色溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| dUTP | 通过反相 HPLC 分离检查 dUTP 的存在 |
| 应用 | 基于探针的一步法 RT-qPCR |
| 样品类型 | RNA和DNA |
| 贮存 | -20 摄氏度 |
| 一致性 | 测试样品与参考样品之间的差异为±0.5 Ct |
| DNase/RNase污染 | 没有可检测到的降解 |
常见问题解答：dUTP 低 LOD 一步法 RT-qPCR 预混液
尿嘧啶 DNA 糖基化酶(UDGase）如何在 RT-qPCR 中使用？
由于qPCR可以扩增微量DNA，因此防止污染至关重要，因为即使是少量的qPCR污染也可能导致假阳性。qPCR污染可能包括来自其他样本的交叉污染、来自实验室其他地方的污染，以及来自之前qPCR实验中使用的扩增产物和引物的残留污染。后者是qPCR中大多数假阳性结果的根源。防止污染可能很困难，因此必须制定实验室规程，以确保一次检测中的DNA不会在后续检测中再次扩增。
尿嘧啶DNA糖基化酶可以特异性地降解已完成qPCR反应并掺入dUTP的产物，使用于扩增的天然核酸模板保持完整。尿嘧啶DNA糖基化酶的活化是qPCR的第一步，在50°C下孵育2分钟；在热启动活化过程中，当温度升至95°C时，尿嘧啶DNA糖基化酶变性。
UDG 和 UNG 有什么区别？
尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG或UDGase）是一个包含六个亚家族的酶家族。家族I的UDGase酶被称为UNG（尿嘧啶-N-糖基化酶基因），因此两者之间没有区别。UDG和UNG这两个术语通常可以互换使用，因为它们在qPCR中具有相同的功能——即防止qPCR残留污染。
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文献和实验的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成
[原理] DNA是通过异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin，Dig）配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物[抗异羟基洋地黄毒苷配基碱性磷酸酶复合物（Dig）Ap]结合，接着在5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐（X-磷酸盐）和硝基四氮唑蓝（NBT）存在下，由酶催化反应，在杂交部位形成蓝紫色带或颗粒。 ［操作］ 1．转移 通过打点吸渍
Random Prime Labeling of DNA Probes with Fluorescein-11-dUTP
The selection of an appropriate labeling reagent for a particular experiment, for the most part, depends on the sensitivity and resolution required. For maximum sensitivity in filter hybridizations radioactive labels, such as phosphorous 32
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