RTL 逆转录酶（无甘油），BioReagent, PCR试
剂, 用于DNA合成, 分子生物学级, EnzymoPure™, 无RNA酶, 用于体外转录, for DNA and RNA applications, 15 U/μL，阿拉丁- ¥99.90
- 阿拉丁
- 上海
- rp216167
- 2026年05月09日
企业认证
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C储存,避免反复冻融；超低温运输
- 英文名：
RTL Reverse Transcriptase (Glycerol-free)
- 库存：
现货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
rp216167-1.5KU
基本描述
产品名称：RTL 逆转录酶（无甘油）
规格或纯度：BioReagent, PCR试剂, 用于DNA合成, 分子生物学级, EnzymoPure™, 无RNA酶, 用于体外转录, for DNA and RNA applications, 15 U/μL
产品介绍：
RTL 逆转录酶 2.0 是一种依赖 RNA 模板的DNA 聚合酶，缺少 3' → 5' 的核酸外切酶活性， 具有 RNase H 活性。该酶可利用 RNA作为模板 ，合成一条互补的 DNA 链，可应用于第一链cDNA合成 ，特别适用于RT-LAMP（环介导等温扩增）。相较于 RTL逆转录酶 1.0，灵敏度显著提升，热稳定性更强，65℃高温反应更稳定。RTL 逆转录酶 2.0（无甘油）可用于制备冻干制剂、可冻干RT-LAMP 试剂等。
产品组分
|
产品应用
1） cDNA 合成；
2） 与阿拉丁Bst DNA 聚合酶 V2 系列产品联合使用，进行 RT-LAMP 等温扩增检测靶标 RNA。
单位定义
以Poly (rA)·Oligo (dT) 为模板/引 物， 在50℃，20min 条件下，掺入1 nmol的dTTP为酸不溶性物质所需要酶量定义为 1 个活性单位 (U)。
质量控制
1、核酸内切酶残留检测：15U本酶和1μgλ-DNA，在 37℃下孵育 16h，琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生明显变化。
2、核酸外切酶检测：15U 本酶和 1μg λ-HindIIIDNA，在 37℃下孵育 4h，琼脂糖凝胶电泳DNA 谱带不发生明显变化。
3、核酸切口酶检测：15U 本酶和 1μg pBR322DNA，在 37℃下反应 4h，琼脂糖凝胶电泳DNA 谱带缺刻<10%。
4、RNase 残留检测：15U 本酶和 0.48μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 4h，RNA 电泳谱带完整度>90%。
5、大肠杆菌 DNA 残留检测：15U 本酶中残留的核算经 E.coli gDNA 特异性 TaqMan qPCR检测，E.coli 基因组残留<1copy。
实验流程
逆转录反应体系：
| 组分 | 体积 |
| Template RNA* | optional |
| Oligo(dT)18~25（50μM）or Random Primer Mix（60 μM） | 2 μL |
| dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL |
| RNase Inhibitor (40 U/μL) | 0.5 μL |
| RTL Reverse Transcriptase (Glycerol-free) (15U/μL) | 0.5 μL |
| 10 × HH RTL Buffer | 2 μL |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
注：TotalRNA推荐使用量1ng~1μg
mRNA推荐使用量50ng~100ng
反应程序
| 温度 | 时间 |
| 25°Cⓐ | 5min |
| 55°C | 10minⓑ |
| 80°C | 10min |
ⓐ如使用RandomPrimerMix增加该孵育步骤；
ⓑ可在10-30min间调整。延长逆转录时间有助于获得更长的cDNA(>5kb)
RT-LAMP反应体系
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| Template RNA | optional | ≥10copies |
| dNTPMix(10mM) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| FIP/BIPPrimers(25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3Primers(25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopBPrimers(25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| RNase抑制剂（40U/μL） | 0.5 μL | 20 U/Rxn |
| RTL逆转录酶2.0（无甘油）(15U/μL) | 0.5 μL | 7.5 U |
| Bst DNA聚合酶(8U/μL) | 1 μL | 8 U |
| MgSO4(100mM) | 1.5 μL | 6 mM（总共8mM） |
| 10×HH RTL Buffer(或10×HH Bst V2 Buffer)* | 2.5 μL | 1×（含有2mM镁离子) |
| Nuclease-free Water | Up to 25 μL |
体系配制完成，涡旋混合均匀，65°C反应1h。
*注：此二者buffer互通，组分完全相同
注意事项
1）本产品在-20℃保存会形成白色固体，从 -20℃取出后放冰上 10 分钟左右，融化后震 荡混匀即可使用；
2）cDNA 产物可在-20℃或者-80℃保存或立 即用于 PCR 反应；
3）防止 RNase 污染，请保持实验区域洁净， 操作时需穿戴干净的手套、口罩。实验所用的 离心管、吸头等耗材均需保证 RNase-free。
级别：BioReagent, PCR试剂, 用于DNA合成, 分子生物学级, EnzymoPure™, 无RNA酶, 用于体外转录, for DNA and RNA applications
产品规格参数
浓度：15 U/μL
储存条件：-20°C储存,避免反复冻融
运输条件：超低温运输
稳定性与储存：Store at -20℃ long term (18 months). Upon receipt, it is recommended to aliquot. Avoid freeze/thaw cycle.
功能和特点
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文献和实验，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR
37°C-50°C ThermoScript™ RT 42°C-65°C RNA在高于65℃时开始水解，对于≤1kb的RNA第一链合成温度可以为70℃，对于＞1kb的RNA则需要＜65℃。 Tth热稳定聚合酶在Mg 存在条件下 作为DNA聚合酶，在Mn 存在条件下作为RNA聚合酶。它可以在最高65℃条件下保温。然而，PCR过程中Mn 的存在会降低忠实性，这使得Tth聚合酶不太适合用于高精确度的扩增，如cDNA的克隆。另外，Tth的逆转录效率较低，这会降低灵敏
引物（红色星号=突变核苷酸，灰色线条 = 删除的序列，蓝色线条 = 插入的序列）。也可考虑使用其他引物设计，如具有 5′ 重叠序列的引物[4-6]。 图 6.使用含突变序列和同源末端序列的 PCR 引物进行的定点突变。该图所示方法阐述了 Invitrogen™ GeneArt™ 定点突变试剂盒的机制，其中，方块代表重组和突变位点。 5.甲基化 PCR 可用于研究位点特异性甲基化。在 甲基化特异性 PCR（MSP）方法中，设计了两个引物对，以区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 首先使用重亚硫酸盐处理
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