Exosupur®细胞上清2步法快速外泌体纯化试剂盒

一、产品介绍：

Exosupur^®细胞上清2步法快速外泌体纯化试剂盒，基于自主盐析法专利开发(专利号:ZL201811302563.0)，可对细胞上清、尿液、脑脊液等成分简单的样本进行快速、大通量外泌体分离纯化，纯化后的外泌体可以直接进行表征相关检测以及细胞学和动物实验。无需超高速离心设备，解决了传统超速离心方法步骤繁琐、依赖于超高速离心机设备、预约困难、耗时费力等难题。

二、产品应用：

本产品适合无血清培养的细胞上清，以及尿液、脑脊液、羊水等大体积样本，即适合外泌体浓度比较低且成分比较简单的样本类型，进行快速外泌体分离纯化。

如本身外泌体浓度特别低想提高得率可先在上述处理后，先用100KDa超滤管对上清进行3-5倍浓缩，再进行后续步骤。

三、产品规格：

四、操作流程：

仅需孵育、离心、重悬、纯化即可完成外泌体分离纯化。

自备试剂耗材：高速离心机(6000g-10000g)；50 ml 离心管；1.5 ml 离心管；1X PBS溶液

五、产品性能数据：

使用ESS050分离的无血清培养的293F细胞上清外泌体，进行电镜观测，结果如上所示。

六、FAQ：

1、如果细胞上清中添加了胎牛血清，还能使用本产品分离外泌体吗？

如果细胞上清中添加了高比例胎牛血清，如10% FBS，使用本产品无法有效去除其中富含的脂蛋白等杂质，需要结合超离、排阻色谱(Exosupur® ES9P11e/ES9P14e)等方法进一步除杂。

使用ESS050分离的含10%常规FBS胎牛血清培养的癌细胞上清外泌体，进行电镜观测，如上所示，血清中杂质较多，因此不建议单独使用本产品进行含血清体系外泌体的分离纯化。

2、样本如何进行预处理？

①收集细胞上清，300g 4℃ 离心10min去除死细胞，3000g 4℃ 离心10min去除细胞碎片，10000g 4℃ 离心10min去除杂质碎片至无明显沉淀，0.22μm微孔滤膜过滤。

②尿液充分涡旋1min后，先3000g离心10min去除沉渣上清进行0.22μm微孔滤膜过滤，滤出液浓缩后备用。

本产品适合无血清培养的细胞上清、尿液、脑脊液、羊水等，外泌体浓度比较低且成分比较简单的样本类型，进行外泌体分离纯化。

如本身外泌体浓度极低想提高得率可先在上述处理后，先用100KDa超滤管对上清进行3-5倍浓缩，再进行后续步骤。 其他类型样本预处理方法，请参考文献或联系我们。 

3、  离心机离心力达不到10000g？

建议离心力可以减少到6000g并4℃离心60min。时间的减少或者离心力的降低对于回收率有一定的影响，可以根据自己样本情况，进行评估。

4、加入A液和B液混匀后，4℃静置孵育最长多久？

建议12h起，但不建议超过24h。 

5、  孵育过夜离心之后无沉淀，这个现象正常吗？

 由于某些细胞上清外泌体含量比较低，加了A液和B液离心之后肉眼无法观察到沉淀，建议：a.离心前根据离心后外泌体所在大致位置进行标记，以便后续弃去上清时减少损失。b.离心后在重悬时使用 PBS仔细吹打离心管壁四周和底部；提取后的外泌体应先进行 NTA/NanoFCM 颗粒浓度或 BCA 蛋白定量检测，再决定是否进行后继实验。