人鼻病毒的3C蛋白酶,组氨酸标签(10U/μL)

含组氨酸标签的蛋白诱导表达及纯化操作指南！

液的 A280，选择 A280 变化明显的管取样进行 SDS-PAGE，分析组氨酸标签蛋白的分布。根据 A280 和电泳图选择合并 A280 相近的管，弃掉没有目的蛋白的管。目的蛋白的脱盐处理可以用透析，也可以超滤，还可以过分子筛。如果需要更大的蛋白浓度，可以使用超滤的办法 。收集的蛋白- 20℃ 保存。说明：只经过 Ni-NTA 纯化，所得蛋白一般不纯，往往混有杂蛋白。这时可以考虑进一步的纯化措施，比如 DEAE, 分子筛，疏水层析等。（二）若为包涵体表达所需特殊试剂：细胞裂解液：50 mM Tris

柱上酶切那点事儿

蛋白的损失。 如何进行柱上酶切 柱上酶切纯化路线比较简单，只需上样后加入蛋白酶，在合适的温度下进行孵育一段时间，经过清洗便可得到纯度较高的无标签的目标蛋白。 去除标签的关键在于选择高效的蛋白酶并构建相应的氨基酸识别序列。下表展示的是几种常见的内切酶及对应酶切位点。 组氨酸标签由于分子量小通常不需要去除。如有必要，可使用 TEV 蛋白酶去除组氨酸标签。由于TEV酶带有六组氨酸标签，因此可实现柱上酶切而得到高纯度无标签的目标蛋白。 PreScission

4 种常用的蛋白纯化标签说明

蛋白纯化的方法很多，如层析法、电泳法、超离心法、超滤等，其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来，且纯度很高，因而备受实验者的青睐。 在进行蛋白表达时，选择合适的标签有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说，常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等，那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢? His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达