pLV3-CMV-3×FLAG-Fluc-IRS4-Neo

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货号：JN020401046

慢病毒感染实验
1.感绿贴壁细胞 
a）将对数生长期的状态良好的细胞接种至所需培养器皿中， 控制细胞接种量使得次日病毒 感染时细胞汇合度 30- 
50%。如果细胞增殖较快， 建议接种细胞密度为 30%， 如果细胞增殖较慢， 建议适当增加接种汇合度， 以病毒感染 72h 细胞汇合度未超过 100%为标准。 
b）感染当天， 取出细胞， 更换为含有合适浓度｛一般为8 µg /ml ) Polybrene 的新鲜完全培养基。 
c）取出病毒于冰上解冻。 根据 MOI 及病毒滴度加入相应的病毒量， 可先用完全培养基稀释。 加入病毒后轻柔 “ 8 ” 字混匀。 当培养器皿底面积较大时， 为增加病毒与细胞接触的几率， 感染时可适量减少培养基体积。 下表为不同细胞培养体系推荐的感染体积及病毒用量｛病毒滴度为1×108 TU/ml ）。 
d) 37℃培养12-16h， 更换为完全培养基， 继续培养。 如细胞状况发生明显变化， 可于感染后8h换液， 保证细胞的正常生长。 
e）继续培养。 期间观察细胞， 若液体变黄， 可对细胞换液维持细胞活性。 
f）感染后72h （ 一般代谢较旺盛的细胞或慢病毒包装容量48h即可观察到荧光， 代谢较慢的细胞可能需要96h甚至更长时间才能观察到荧光），观察感染效率。 如果需要筛选稳定细胞株， 可以根据预实验选用合适的抗生素及合适的工作浓度进行筛选。 
2.感染悬浮细胞 
a）感染当天， 将对数生长期的状态良好的悬浮细胞收集， 根据需要的细胞量分装于1.5ml离心管中并离心收集。 
b）用100-200 µ L含有合适浓度｛ 一般为8 µg/ml ) Polybrene的无血清培养基重悬细胞沉淀。 
c） 取出病毒子冰上解冻。 根据MOJ及病毒滴度加入相应的病毒量， 可先用无血清培养基稀释；若需要稀释病毒， 则上一步重悬细胞沉淀时需要考虑稀释病毒的体积。 
d）加入病毒后轻柔吹打混匀。 将1.5ml离心管放于37℃培养箱中孵育30mino 
e）将管中混合液吸出加到培养器皿中， 加入足量新鲜的完全培养基。 
f）感染后12h更换培养基。 
g）感染72-96h后观察细胞阳性率。 
注：以上为病毒感染悬浮细胞的一锻方法， 但悬浮细胞较贴壁细胞更难感染， 因此如有必要， 可采用离心感染方法提 
高感染效率。 将细胞接种至培养器皿中， 加入适量的病毒后， 将培养器皿密封， 用平角转子离心机1000g离心1h， 再放会培养箱正常培养。