产品简介:
RIPA总蛋白裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液。RIPA总蛋白裂解液裂解后的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA总蛋白裂解液的主要成分为50mM Tris-Hcl,150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,
可以有效抑制蛋白降解。
包装内容:
产品货号 |
产品名称 |
规格 |
WB001 |
RIPA裂解液 |
30ml |
保存条件:
4℃保存,一年有效
操作说明:
本RIPA总蛋白裂解液对于组织样品:
1.组织块用冷PBS洗涤,去除血污。剪成小块置于匀浆器中。
2.加入10倍组织体积本试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)冰上彻底匀浆。
3.将匀浆液转移至1.5ml离心管中,振荡。冰浴30min,期间用移液器反复吹打,确保细胞完全裂解。
4.12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白溶液。
本RIPA总蛋白裂解液对于培养细胞样品:
1.对于贴壁细胞:
a.用PBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。
b.加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用前数分内加入蛋白酶抑制剂)于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶,使试剂与细胞充分接触。
c.用细胞刮刀将细胞及试剂刮下,收集到1.5ml离心管中。
2.对于悬浮细胞:
离心收集细胞,每6孔板细胞加约250 ul细胞总蛋白提取试剂(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),振荡。
3.冰浴30min,期间每10分钟用200ul移液器反复吹打数次,确保细胞完全裂解。
4.12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白。
本RIPA总蛋白裂解液注意事项:
对于组织样品:
每50mg组织约加入1ml的RIPA蛋白裂解液。对于软骨、皮肤等组织,可适当减少试剂用量,以提高蛋白浓度。
对于培养细胞样品:
1.正常细胞密度下,每个6孔板细胞加入250ul左右裂解液。其它类推。
2.裂解时可能会出现较粘稠状。可用移液器反复吹打,直至呈液状为止。如果一直较稠,可再加入适量裂解液。
3.此试剂对人体有害,请适当防护。