RNAfixer 无液氮 RN

A 样品储存液

RNAfixer 无液氮 RN

A 样品储存液

￥702

价格 ￥702
品牌抚生
货号 A-Hc2011
产地国产
更新日期 2024年07月19日

上海抚生实业有限公司

品牌商

7 年钻石会员

库存：
26
保质期：
1 年以上
供应商：
上海抚生
保存条件：
18-25℃
规格：
100ml

商品属性：

产品名称	规格	货号
RNAfixer 无液氮 RNA 样品储存液	100ml	A-Hc2011

保存条件：

产品介绍：

RNAfixer 是一种液态的无毒的组织保存液体，可以迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆中，在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。取下组织薄片后立刻浸入RNAfixer 保存并不影响将来提取RNA 的质量和数量。RNAfixer 消除了RNA 样品需要立刻处理或者必须液氮保存的不方便。浸入RNAfixer 后，新鲜组织细胞中RNA 可以完好的在37℃下保存一天，在25℃下保存一周，4℃下保存一个月，在-20℃或-80℃下长期保存。
RNA 病毒样品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一个月。适用于动物组织（心、肝、肾、肌肉、睾丸、脑、脾等）、培养细胞、RNA 病毒、果蝇、细菌、白细胞、一些植物组织等。
产品特点：
1.操作容易：将组织剪成适当大小，浸没在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
2.无需液氮：使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。
3.方便运输：处理过的样品能在25℃保存一周,使样品邮寄和运输变得容易和便宜,有利学术合作和交流。
4.多次冻融: 经RNAfixer 处理的样品可反复冻融多次, 其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA 的质量。
5.可比性强: RNAfixer 能减少大规模样品处理中的误差,增加各次实验数间的可比性, 对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
使用说明：
RNAfixer 只用于新鲜组织，浸泡入 RNAfixer 前禁止冷冻组织。只需要迅速将新鲜组织剪成长、宽，高任意一边厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可（只要有一边厚度不超过 0.5 厘米，RNAfixer 可以迅速渗透，其它两边的尺寸并不重要）。将新鲜组织浸泡在 5 倍体积的 RNAfixer 中，按照指示存放在适当的温度。
1.动物组织 RNAfixer 并不破坏或者溶解组织结构，因此浸泡在 RNAfixer 中达到渗透平衡的组织可以从 RNAfixer 中取出，然后切成更小的块，然后放回到 RNAfixer 中下次继续使用。小器官如小鼠肝、肾、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。
推荐不同组织样品的 RNAstore 使用量：

2.植物组织很多植物组织直接浸泡入 RNAfixer 即可，有的植物有天然渗透屏障如腊质保护层，需要先破坏掉腊质层,便于 RNAfixer 渗透。
3.组织培养细胞细胞吹打下来后,离心收集细胞,弃上清，用冰浴的 PBS 缓冲液洗一次去除残留培养液。将细胞悬浮在少量 PBS 缓冲液中。加入五到十倍体积 RNAfixer, 混均。
4.白细胞对于全血中白细胞的保存，需将白细胞从红细胞和血清中分离出来，并按组织培养细胞一样处理后，白细胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要将全血、血浆或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中，因为它们蛋白含量过高，与 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
5.细菌
细菌并不能在 RNAfixer 中生长，但是 RNAfixer 并不破坏细菌，E. coli 在 4℃保存一个月仍旧可以提出完整的 RNA。
RNAfixer 中样本的存放：
1.存放在-80℃样品长期保存用。将 RNA fixer 中样本放置于 4℃过夜，然后将样本捞出，尽量去除干净 RNAfixer 液体，然后放置于-80℃。对于组织培养细胞，则不需要去除RNAfixer，直接冷冻于-80℃，并不会裂解细胞。样品使用时可以在室温融化，并且还可以再次冷冻而不影响 RNA 的完整性和产量。
2.存放在-20℃将 RNAfixer 中样本放置于 4℃过夜，然后转移到-20℃。在-20℃样品并不会被冰冻,但是可能会形成一些结晶，这并不会影响将来的 RNA 提取。样品使用时可以在室温融化，并且还可以再次冷冻而不影响 RNA 的完整性和产量。
3.存放在 4℃样本可以在 4℃存放一个月。
4.存放于 25℃存放于 25℃样本的 RNA 在一周内保持完整，保存两周的样品 RNA 有轻微降解，勉强能用于northern analysis, 但是质量足够用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
5.存放于 37℃存放于 37℃样本的 RNA 在 24 小时内保持完整，3 天的时候有部分降解。RNAfixer 保存样本的 RNA 提取：将样本从 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池，用自来水冲即可，不需特殊处理。
1.组织
用干净镊子将样本从 RNAfixer 中捞出，用吸水纸稍稍吸去残留的 RNAfixer 后，可以和新鲜组织一样按照液氮研磨，然后匀浆处理的标准程序进行提取 RNA。
2.细胞
对于储存在 RNAfixer 中的细胞有两种选择。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一个是直接从细胞和 RNAfixer 的混合物提取。
1）去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的细胞变得不那么脆弱，可以承受较高的离心速度而不被裂解。我们有在 5000g 离心成功收集细胞的经验，由于每种细胞的强度不一样，可以先用不重要的细胞做个预试验，以保证在使用的速度下离心不会破坏细胞。另一个选择是在离心前加等体积的 PBS 稀释 RNAfixer 和细胞的混合物，以减少溶液的密度，使细胞溶液可以沉淀下来。
2）不去除 RNAfixer，直接提取 RNA
也可以直接加 10 倍体积的一步法提取试剂（如 TRIpure，TRI reagent）到细胞和RNAfixer 的混合物，然后按照正常步骤操作。

注意事项：
1. 本产品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

2. 请穿实验服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染。

3. 需自备氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇 (DEPC处理水配制)、DEPC和DEPC处理水。

4. 样品用Total RNA Extraction Reagent匀浆后，如果不加入氯仿进行下游实验，可先-70℃冻存，可保存一个月以上。

5. RNA沉淀在75%乙醇中，4℃可保存1周，-20℃可保存1年。

6. RNA半衰期比较短，易降解，建议抽提后尽快进行后续实验。

7. 本产品仅作科研用途！
PCR相关试剂常见问题：
一、提取的RNA量较少

1、样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA没有被完全释放出来。

2、得到的RNA沉淀未完全溶解。

二、RNA样品的A260/A280值小于1.6

1、检测吸光度时，RNA样品用水溶解不用TE。低离子浓度和低pH条件下，A280值会偏高。

2、样品匀浆时加的试剂量太少，RNA与蛋白质，DNA不能够完全分离。

3、匀浆后样品未在室温放置5分钟，RNA与核蛋白未完全解离。

4、水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA污染。

5、抽提得到的RNA沉淀未完全溶解。

三、提取RNA样品发生部分或完全降解

1、所用组织或细胞不新鲜，样品没有被及时液氮冻存，导致组织或细胞中的RNA降解。建议使用组织RNA室温保存液等保存未能够及时提取的组织或细胞。

2、细胞在胰蛋白酶时消化过长，导致未加TotalRNAExtractor前RNA已经部分降解。

3、溶液或离心管未经RNase去除处理，RNase的污染导致RNA被降解。

4、电泳时使用的甲酰胺pH小于3.5，导致RNA发生酸解。

四、RNA样品中存在DNA污染

1、样品匀浆时加的试剂体积太少导致，如果已存在DNA污染，可用非酶DNA清除剂A去除。

2、样品中含组织溶剂（如乙醇等）或碱性溶液，致水相减少或pH升高。

五、RNA样品中存在蛋白和多糖污染

1、样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解完全。

2、水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA。
细胞裂解：
1、组织样本：

Trizol用量：每50-100mg 组织加1 ml Trizol，样品体积不应超过Trizol体积的10％。

（1）将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理；

（2）将研磨好的组织粉末快速转入装有1ml Trizol的2 ml离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上，待所有的样品研磨完；

（3）裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等，匀浆后仍会存留有不溶物质，可于4℃ 12,000 x g 离心10min，然后吸取上清至一新的离心管中。

2、细胞样本：

（1）贴壁细胞：吸尽培养液，每10cm2培养面积（6孔板单孔或35 mm平皿）加入1ml Trizol，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。注：Trizol的使用量应由培养皿表面积决定，而非由细胞数目决定。Trizol量不足可能导致提取的RNA中有DNA污染；

（2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每 5-10×106动植物或酵母细胞，或每 1×107细菌细胞加入1ml Trizol，用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。

注：添加Trizol前切勿洗涤细胞，以免RNA降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞。
RNA回收：
（1）按照每1ml Trizol的最初使用量加入0.5ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置10min；

（2）4℃ 12,000 x g 离心10min，弃除上清，可见胶状的RNA沉淀；

（3）按照每1ml Trizol的最初使用量加入1ml 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀；

（4）4℃ 12,000 x g离心5min，弃除上清；

（5）室温倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥离心机，以免RNA过干，难以溶解）；

（6）加入适量（如25ul）DEPC-ddH2O或TE缓冲液，用加样器吹打数次溶解RNA；

（7）通过RNA电泳以及紫外分光光度计检测，确定RNA的浓度、纯度和完整性；

（8）所得的RNA应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！
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温馨提示：不可用于临床治疗。

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