过表达慢病毒构建及包装实验

过表达慢病毒构建及包装实验：慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

1 、过表达慢病毒构建及包装实验特点：

1.1 直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。

1.2 可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因**和转基因动物研究。

1.4 无需转染试剂，操作简便。

1.5 可以根据客户需要制备多种标记。

2、过表达慢病毒构建及包装实验原理：

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

3 、过表达慢病毒构建及包装流程：

3.1 含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。

注：客户也可以提供构建好的重组慢病毒表达载体。

3.2 慢病毒表达载体与包装系统共转染病毒包装细胞。

3.3 收集病毒液。

3.4 纯化和浓缩病毒。

3.5 分装、- 80 oC保存。

3.6 滴度测定及无菌检测。