capan-1/GEM人胰腺癌细胞吉西他滨耐药株
产品基本信息
细胞名称:capan-1/GEM人胰腺癌细胞吉西他滨耐药株
种属来源:人
组织来源:胰腺
细胞形态:多边形细胞样
生长特性:贴壁生长
培养基::80% IMDM+20% FBS+PS
生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
传代方法:1:2至1:3,每周 3次
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
支原体检测:无
细胞培养操作
1)复苏细胞:将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
重要提醒
注:该细胞比较难消化,且消化后贴壁时间较长,因此传代处理后24-48h内尽量不要移动,防止影响贴壁,该细胞易聚团成斑块状生长,生长非常缓慢,属正常现象,保持营养充足即可。
培养瓶中的培养基是不含药物的,待细胞状态良好,稳定生长时,可以用含加含15nM的吉西他滨药物培养基处理48h,期间若有部分细胞悬浮起来,属于正常情况,通过换液去掉即可。冻存时请不要在培养基中加药物。
注意事项
1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。