实时监测微孔板中的活细胞生物能量代谢
线粒体呼吸和糖酵解这两个主要的能量产生途径,分别涉及细胞耗氧量和质子释放率。Seahorse XF 技术使用无标记传感器检测这些分析物中的细胞外变化,以测定细胞呼吸率、糖酵解和 ATP 产生。将细胞接种于定制 96 孔 XF 微孔板的分析孔中,融合率为 50%–90%。悬浮细胞附着在孔底,实现灵敏度最大化。
形成微室,并计算每分钟细胞外流量速率
仪器将探针板降低至分析孔中。传感器位于孔底上方 200 µm 处,形成约 2 µL 的瞬时微室。随着氧气和 pH 水平的变化,仪器可读取传感器中的相应变化。通常进行 3 分钟测量,然后自动计算速率。测量期结束后,升高探针,使细胞外培养基恢复到基线条件。
最多注入 4 种化合物,实时测试响应或研究生物学机理
探针板还配置有加药口(每孔 4 个),可在分析过程中将调节因子注入细胞孔中。当完成仪器方案配置后,系统会将化合物“A”注入分析孔中,缓慢混合,确保化合物在分析培养基中均匀分布。所有孔以此方式同步处理。系统将自动执行后续测量周期、方案规定的任何额外加药及速率计算。