实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞抗原 G（HLA-G）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 HLA-G，再与 HRP 标记的HLA-G 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 HLA-G 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞抗原 G（HLA-G）浓度。 用途：本试剂盒用于体外定量检测大鼠 血清、血浆、或其他生物液中大鼠白细胞抗原 G（HLA-G）浓度。基本性能 | 性能 |
| 灵敏度 | 0.25pg/ml |
| 检测范围 | 1pg/ml-40pg/ml |
| 特异性 | 可检测样本中的大鼠中大鼠白细胞抗原 G（HLA-G）浓度。
且与其他类似物无明显交叉反应 |
| 重复性 | 板内，板间变异系数均《10% |
试剂盒组成及保存 | 中文名称 规格 开封后保存条件 |
ELISA A酶标板 | 96T：8 孔×12 条
48T：8 孔×6 条 | 2-8℃ 90天 |
标准品 | 96T：0.5mlx1 （80pg/ml)
48T; 0.25mlx1 | 2-8℃ 90天 |
HRP标记抗体 | 96T：6mlx1
48T：3mlx1 | 2-8℃ 90天 |
样品稀释液 | 96T：6mlx1
48T：3mlx1 | 2-8℃ 180天 |
标准品稀释液 | 96T：1.5mlx1
48T：1mlx1 | 2-8℃ 180天 |
显色剂A | 96T：6mlx1
48T：3mlx1 | 2-8℃(避光） 180天 |
显色剂B | 96T：6mlx1
48T：3mlx1 | 2-8℃(避光） 180天 |
终止液 | 96T：6mlx1
48T：3mlx1 | 2-8℃ 180天 180天 |
30倍浓缩洗涤液 | 96T：20mlx1
48T：10mlx1 | 2-8℃ 180天 180天 |
说明书 | 1份 | |
封板膜 | 3张 | |
密封袋 | 1个 | |
说明；未拆封的试剂盒可以在2-8℃ 保存六个月 试剂盒所需自备物品 1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱 4. 双蒸水或去离子水 5. 吸水纸 6. 加样槽样品收集方法（具体处理方法请咨询） 1. 血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右 （2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应该再次离心
3.尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
4.组织匀浆；用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将剪碎的组织与 对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适 当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步 裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取 上清检测。
5.细胞提取液；贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮 细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。 将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。6.细胞培养上清或其他生物体液；收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。样本收集注意事项1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。检测前准备工作 1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。
2.用双蒸水将30×浓缩洗涤液稀释成1×工作液。未用完的放回4 ℃。
3.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 40pg/ml
| 5号标准品 | 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
|
20pg/ml
| 4号标准品 | 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
|
10pg/ml
| 3号标准品 | 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
|
5pg/ml
| 2号标准品 | 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
|
2.5pg/ml
| 1号标准品 | 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
|
操作步骤； 1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液.
40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 2.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 3.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 4.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 5.温育：操作同 2 6 洗涤：操作同 3 7 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟. 8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终 止液后 15 分钟以内进行。
结果判断： 1。每个标准品和标本的OD 值应减去空白孔的OD 值。
2.以标准品的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，利用计算机软件采用直线回归的拟合方法创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。
3.若样本的OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。典型数据由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。详情请看质检报告
