重组小鼠NFATC1蛋白(活化T-细胞核因子1)

重组蛋白（recombinant protein）是指应用重组 DNA 或重组 RNA 技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因（gene of interest，GOI），连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞，利用宿主细胞的遗传系统，表达出有功能的蛋白质分子。重组蛋白抗体抗原等产品已被广泛应用于生物医药、细胞生物学及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分，常被被广泛应用。重组蛋白主要有四大表达系统：原核细胞（主要是大肠杆菌）、酵母细胞、昆虫细胞、以及哺乳动物细胞表达系统。

我公司优势供应重组小鼠NFATC1蛋白(活化T-细胞核因子1)，重组蛋白系列产品满足各种实验室的基本需求，具体产品更多详细说明书资料欢迎免费向我们索取。
纯度：>90% as determined by SDS-PAGE.
内毒素：<0.1 EU/μg of the protein by the LAL method
用途：ELISA, Immunogen, SDS-PAGE, WB
注意：本公司产品仅供科研使用，不用于临床或其他诊断治疗用途。

                                                 重组蛋白表达体系选择

研究目的                                             蛋白要求                                    最适表达系统 
用作抗原，获得                             纯度>80%，不需要蛋白修饰             原核表达体系
特异性抗体用于检测                      或天然活性，可带标签

蛋白质结晶及晶体                          纯度>95%，浓度通常在10 mg/mL   2/3是原核表达体系，1/3是昆虫细胞
结构研究                                                                                             表达体系与哺乳动物细胞表达体系

蛋白的功能研究                            需要保存蛋白的天然活性                    原核表达体系和真核表达体系

用于药物研究的                           一般要求尽量保存天然序列，               真核表达体系 
蛋白质                                       具有天然活性

                                               重组蛋白表达体系对比
表达体系                  优缺点 

原核体系                  繁殖快、成本低，产量高，但不能进行糖基化修饰，常为包涵体

哺乳动物细胞            结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后加工，活性更好，但表达水平较低，
                               周期长，技术要求高

酵母细胞                  易操作，蛋白背景弱，适合大规模生产，便于纯化，但存在产量不高以及糖基化达不到要求等问题

昆虫细胞                 功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势，但糖基化程度低，形式比较单一，活性不如哺乳动物细胞表达系统

重组蛋白如何复溶及保存？

由于工艺原因，蛋白冻干粉产品会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻状、雪花状，这些都是正常现象。冻干的体积大小也会受冻干前缓冲液组分、盐离子浓度、产品浓度等影响。此外，在运输过程中，冻干颗粒可能会分散，并粘附于瓶壁和瓶盖。

那么，如何更好地溶解重组蛋白呢？
第一步：开盖前需离心
在开盖使用之前，需先离心，将冻干粉收集于管底。
实验操作: 10,000-12,000 rpm 离心 30 s，若没有高速离心机，3000-3500 rpm，离心 5 mins。

第二步：产品复溶
还是以 Human EGF 为案例；10 μg 规格溶解，论长期实验还是短期实验，溶解的浓度不低于 100 μg/mL！！

短期实验：
使用复溶 Buffer 直接溶解的重组蛋白，液体可在 2-8℃ 最长保存 1 周。对于周期较短的实验 (不超过 7 天)，可以直接取该条件下保存的细胞因子或者重组蛋白溶液加入到培养体系内即可，一周之内用完。(复溶 Buffer: 可参考重组蛋白使用指南里建议的溶液或者使用已贴心搭配好的蛋白伴侣）

长期实验：
以下步骤供参考：
1、先加 20-30 μL 建议复溶液
2、再加 70-80 μL 含载体蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 或 5% 海藻糖) 的缓冲液/培养基
3、分装大于 20 μL/管

在重组蛋白生产中应用广泛。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性和稳定性；便于目的蛋白的检测、示踪和纯化。随着研究的需求和技术的发展，各种标签应运而生，多样化的标签可以满足不同的应用场景。许多重组蛋白在生产过程中溶解度较差，可以使用融合标签以增加溶解度，融合标签可用于目的蛋白没有特异性抗体的多种应用，如Western Blot、免疫沉淀、ELISA等。

蛋白标签类型主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。

- 表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 Western Blot 和免疫共沉淀。最常用的表位标签有His、FLAG、HA等。
- 亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如SUMO、Trx、MBP等。
- 荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（GFP）、橙色荧光蛋白（OFP）、红色荧光蛋白（RFP）和黄色荧光蛋白（YFP）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。

重组小鼠NFATC1蛋白(活化T-细胞核因子1)如何选购？

考虑融合标签的影响。任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。

考虑是在N-端还是C-端标记。N-端或C-端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建N-端标记和C-端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。

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