pPIC3.5K

质粒类型：毕赤酵母表达载体

表达水平：高拷贝

启动子：AOX1

克隆方法：多克隆位点，限制性内切酶

载体大小：9004 bp 

5' 测序引物及序列：5´ AOX1:5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´

3' 测序引物及序列：3´ AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´

载体抗性：Ampicillin (氨苄青霉素),Kanamycin(卡那霉素)

筛选标记：HIS4

备注：插入基因是必需包含起始密码子ATG。

pPIC3.5K是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。1. pPIC3.5K载体大小为9004 bp。2. 在多克隆位点区域，拥有5个单一的限制性酶切位点：BamH I，Snab I，EcoR I，Avr II和Not I。3. 胞内表达。4. 载体构建时，需要包含一个ATG启动子，同时需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart，1991；Kozak，1987；Kozak，1990) 5. 毕赤酵母中使用HIS4基因筛选。 6. 将基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。7. 将基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。8. 将基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II限制酶线性化质粒，产生的酵母基因型为His+ MutS。

HonorGene官网：https://www.honorgene.com/product_list/carrier_library/123151.html