pCold TF / pCol

质粒类型：大肠杆菌冷激表达载体

表达水平：高

启动子：CSPA

克隆方法：多克隆位点，限制性内切酶

载体大小：5769bp

5' 测序引物及序列：pCold-TF-F1：5'-CCACTTTCAACGAGCTGATG-3'；pCold-TF-F2：5'-GCGAAAGTGACTGAAAAAG-3'

3' 测序引物及序列：pCold-R：5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3'

载体标签：N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa

载体抗性：Ampicillin (氨苄青霉素)

备注：温度诱导，冷休克蛋白表达载体

本制品是一种利用冷休克基因cspA启动子进行蛋白质表达的载体。载体上Trigger factor是大肠杆菌来源的分子伴侣基因，作为可溶性蛋白标签，可与目的蛋白质进行融合表达，提高目的蛋白质的可溶性。在cspA启动子下游插入了lac operator，可以严格调控目的基因的表达。另外，在cspA启 动子下游还依次插入了5'非编码区 (5'UTR)、翻译增强元件 (TEE)、His-Tag序列、TF序列和多克隆位点 (MCS)。在TF序列和MCS之间还插入了HRV3C Protease、Thrombin和Factor Xa的切断位点，用来消除融合蛋白质的标签。 此外，因为本制品的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。

用途：利用冷休克基因 (CspA) 的启动子表达目的蛋白质。

Takara的pCold TF载体是一种融合表达可溶性的标签"触发因子（Trigger Factor,TF）伴侣"的冷休克载体。"触发因子"（48KD）是原核核糖体相关的分子伴侣蛋白（48 kDa），有利于新表达的多肽的共翻译折叠。正因为它来源于大肠杆菌，保证了触发因子能够在大肠杆菌表达系统中高表达。 pCold TF载体由CSPA启动子及其下游的序列组成，其下游序列主要包括包括5'非翻译区（5'非编码区），翻译增强元件（TEE），His标签序列，多克隆位点（MCS）。Lac操纵子插入在CSPA启动子下游，以确保严格的表达调控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa识别位点位于“Trigger Factor”和多克隆位点（MCS）之间，以便表达的融合蛋白上将标签去除。 大多数大肠杆菌菌株都可以可以作为本载体的表达宿主。pCold TF载体提供冷休克诱导的方法高水平表达目的蛋白，再加上触发因子（伴侣）的表达来提高正确的蛋白质折叠，从而实现高效可溶性表达其他系统中难以对付的蛋白。

HonorGene官网：https://www.honorgene.com/product_list/carrier_library/122955.html