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自2013年CLARITY组织透明化方法诞生以来,完整生物大组织的透明、荧光标记和三维成像已成为生命科学领域一个热门的议题。许多科研工作者致力于探索和改进各种透明化方法:如3DISCO(2012)、iDISCO(2014)、PEGASOS(2018)等油性透明化方法,SeeDB(2013)、CUBIC(2014)、UbasM(2017)等水性透明化方法,PACT(2014)、SWITCH(2015)、SHIELD(2018)等基于水凝胶的透明化方法,以期获得一套全组织高分辨率(至少细胞级分辨率)成像的解决方案,专门用于探索神经、血管等大尺度结构在完整脑、心、肝、脾、肺、肾、肿瘤、骨骼中的3D准定位和测量。
组织透明化已经成为一种较为强大的技术,越来越多的实验室开始选择将其引入具体的科研项目中。由于有众多文献可供参考,因此前期的组织透明化可以从试剂原料选择到操作细节步骤都是有据可循,但是到了最后透明化匹配阶段,却举步维艰:样本需要再继续透吗?这种状态样本透好了吗?透好的样本到底该是怎样的?
图示情况左:换个角度看样本,还需要继续再透吗?
情况中:已经走完全部流程,样本透明程度难以界定。
情况右:透好后样本形态不全,透好的样本到底该是怎样的?
提供透明化实验方法的文献仅仅是提供图示参考,并未有专门介绍如何判断透明化样本状态的方法或工具,因此样本经过透明化处理后,很难对其透明化程度进行准确判断,甚至需要成像完成后再反过来推测是否透明化存在问题。因此如果不借助合适的辅助工具,新手实验者在缺乏经验情况下,不仅难于判断样本透明化程度,更难去依据样本状态去优化实验条件,即使是经验丰富的实验人员,也很难做到即快速又准确。
锘海新研发的透明化组织底透台(货号:NH210901,图1)是基于透明化方法研发中,为实现快速、简便、准确判断样本透明化程度(图2),可为样本透明化过程提供客观且美观的存档记录的需求出发(图3),潜心优化设计的一款用于判断样本透明化程度的底透台。该底透台可产生强度均匀的背光,为样本提供均匀一致的光照;光照强度可调,可适用于不同亮度工作环境;A4尺寸面板,可覆盖各种透明化样本尺寸;左侧大面积为带有精确刻度的方格,可方便准确判断样本大小;右侧小面积留白,可为样本内气泡定位、样本修块等提供全白背光辅助。
图1. 锘海透明化组织底透台
图2. 以小鼠脑为例透明化过程在底透台上的记录
图3. 样本透明化前后使用底透台对比效果
*注:以上透明化图片版权归锘海生命科学所有,图片盗用将追究责任。
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