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    CellLINK 系列细胞染料

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    CellLINK 系列细胞染料
    价格: 询价
    品牌: Tingocell
    试用品规格: 10T
    免费试用 优质试用报告提升试用成功率
    试用份额:
    5

    试用倒计时:
    xx xx xx xx秒后结束
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      • 数量: 40T
      • 英文名: CellLINK 505 Labeling kit
      • 供应商: 天九再生医学
      • 保存条件: 4℃
      产品介绍:

      CellLINK 505 是一种基于化学偶联的细胞膜荧光标记探针,该荧光探针能够以共价偶联的形式与细胞膜特异性结合,被激发后可以发出稳定、明亮的绿色荧光,其激发光谱和发射光谱(Exmax=505 nm, Emmax=535 nm)。 CellLINK 505 被广泛应用于各种细胞的细胞膜结构的荧光标记,通常不会发生明显的透膜现象。标记过程中偶然脱落的荧光探针也不会对其他膜结构或者蛋白进行二次标记。CellLINK 505 能够高效且可控地对细胞膜染色标记, 标记效率及稳定性普遍高于一般亲脂性膜染料。



      使用说明:

      CellLINK 505 可以特异性标记细胞膜,标记前后须用 DPBS 洗涤细胞 2~3 次,以避免影响标记效果。

      产品用途:

      细胞染色、细胞示踪

      贮存条件/有效期:

      2~8 ºC 避光保存,一年有效。

      注意事项:
      • 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
      • 本产品仅限于专业人员的科学研究用途,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
      • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


      CellLINK+EvLINK双染策略

      FilmCLICK Tech. 是天九再生医学研发的基于共价偶联的膜特异性专有标记技术,该技术具不聚集、不弥散、不二次标记的特点。根据外泌体膜与细胞膜的结构差别,天九分别开发出针对外泌体膜的EvLINK 系列染料与针对细胞膜结构的CellLINK系列染料,标记后被激发可以发出稳定、明亮的绿色/红色荧光。

       

      外泌体的细胞摄取实验中有两个难以回避的问题:

      1)聚集造成的假阳性:常规亲脂性染料在水溶液中自发形成染料聚集体或团块,难以吹散,聚集染料的荧光信号极易与外泌体混淆,引起观测结果的假阳性;

      2)二次标记造成的假阳性:由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性,常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落,会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号。

       

      EvLINK+CellLINK双染策略,解决外泌体摄取实验假阳性的完美方案。

       

      99%标记率,不二次标记的膜特异性染料

       

      基于FilmCLICK Tech.技术开发的EvLINK 具有极高的特异性和高于99%的标记率,且一旦EvLINK从外泌体表面脱落,其活性基团即刻变性失活,掉落的EvLINK 仅发出无法被检测的微弱荧光,不再对膜结构二次标记,避免染料二次标记带来的假阳性。Fig.1分别为EvLINK 对外泌体的标记率及化学模拟EvLINK 活性基团变性后对外泌体的标记率:

      Fig.1 (a)EvLINK 505 对外泌体的标记率与(b)化学模拟脱落的的EvLINK 505 结构对外泌体的标记率

       

      不聚集、不弥散的“真实”染色

       

      EvLINK 通过共价偶联外泌体膜而实现标记发光,避免了两大“假阳性”:

      1)非亲脂性染料,无聚集趋势,避免了因染料聚集带来的假阳性

      2)不弥散,仅标记外泌体膜轮廓,不标记细胞膜,避免了染料弥散二次着色细胞膜带来的假阳性。Fig.2为弥散性亲脂染料DIO标记的外泌体与非弥散性EvLINK 505标记的外泌体被U251细胞摄取结果对比,可以看到明显的DIO弥散标记细胞膜的痕迹。

      Fig.2 弥散性亲脂染料DIO标记的外泌体(a)与非弥散性EvLINK 505标记的外泌体(b)被U251细胞摄取

       

      保留外泌体结构

       

      EvLINK 被广泛应用于各种动植物细胞来源的外泌体的体内外示踪剂,对外泌体的形态学及其生物学功能的影响微乎其微。我们对EvLINK 标记后的外泌体进行TEM、nanoFCM和Western blot表征(Fig.3),发现:

      1)标记后的外泌体在透射电镜下仍然保持标志性的外泌体茶托状结构;

      2)标记后外泌体平均粒径分布差异不明显,仅增加~5 nm,这是大量EvLINK 均匀的负载在外泌体表面的结果;

      3)Western blot 显示标记前后蛋白的条带位置不变,说明 EvLINK 不会标记外泌体表面蛋白。

       

      Fig.3 被EvLINK (a)标记后和(b)标记前的外泌体的TEM图像;被EvLINK (c)标记后和(d)标记前外泌体的粒径分析(nanoFCM);(e)EvLINK标记前后的外泌体Western blot:左为标记前的外泌体,右为经EvLINK标记后的外泌体。

       

       

      EvLINK+CellLINK双染策略

       

      基于FilmCLICK Tech.技术开发的CellLINK系列染料具有同样的膜标记特点,可以清晰的展现细胞膜轮廓,与EvLINK结合可以完美实现外泌体被细胞摄取实验。Fig.4 为EvLINK 505 标记的外泌体+CellLINK 标记细胞膜和PKH-67 标记的外泌体+F-actin摄取实验对比,图Fig.4a中可以看到CellLINK 555标记的清晰的红色膜轮廓,经过EvLINK 505标记后的绿色外泌体分散在细胞膜内;Yu等[1]使用F-actin 标记细胞膜轮廓,PKH-67标记外泌体,尽管共聚焦显微镜下观测到的外泌体明亮的绿色荧光,然而该绿色荧光呈弥散状分布,难以较好区分外泌体与细胞膜。

      Fig.4 (a)EvLINK 505 标记的外泌体+CellLINK 标记细胞膜和(b)PKH-67 标记的外泌体+F-actin标记细胞膜[1]摄取实验对比

       

      细心的同学可能注意到了,为什么merge中有黄色光点呢?这要从实验操作中探寻黄色光点的身份。有了EvLINK+CellLINK 染料组合,只需两步即可完成外泌体摄取实验:1)首先用EvLINK标记外泌体,去除游离染料后,与细胞共培养,此时细胞吞噬EvLINK标记的外泌体;2)使用CellLINK 标记细胞膜,PBS洗去游离染料后,共聚焦显微镜下观测即可。

       

      Fig.5中,红色表示细胞膜,绿色表示外泌体,黄色颗粒状表示被EvLINK+CellLINK双染的区域,也就是未完全进入细胞膜的外泌体

       

      Fig.5 (a)CellLINK 555 (U251细胞膜)+EvLINK 505(牛奶外泌体)双染外泌体摄取实验(b)CellLINK 555(A549细胞膜)+EvLINK 505(牛奶外泌体)双染外泌体摄取实验

       

      由于CellLINK 无细胞膜选择性(会标记外泌体)且完全不透过细胞膜,EvLINK+CellLINK双染策略不仅仅可以看到被细胞摄取的外泌体(绿色),还能清晰分辨出没有完全进入细胞膜的外泌体(黄色)。

       

      基于FilmCLICK Tech.开发的EvLINK和CellLINK由于上述特性,我们推出了EvLINK+CellLINK双染技术,可以帮助科学家完美解决外泌体摄取实验中的假阳性问题。

      温馨提示:不可用于临床治疗。

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    天九再生医学(天津)科技有限公司
    • 联系人:

      周雷鸣

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      上海市浦东新区青黛路800号1幢B座412

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      试剂,抗体,细胞库 / 细胞培养,ELISA 试剂盒,技术服务,耗材,论文服务

    • 经营模式:

      生产厂商,科研机构

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