牛血清是常用的细胞培养基添加成分,它富含多种营养,满足细胞粘附、生长、增殖、解毒等需求。牛血清中也含有外泌体,并可能对所培养细胞具有一定作用。2020年,有文献报道了胎牛血清外泌体对成骨细胞的增殖起促进作用,则确证了血清中的外泌体确实在细胞培养中发挥一定的作用。
该实验的研究设计如下:
一、外泌体的提取和确证。
取15 mL牛血清,通过超速离心100 000xg获得外泌体,0.22um过滤清洗后,将外泌体溶于100ulPBS中。
并进行透射电子显微镜观察,
以及后期WB检测标志蛋白确证。
二、细胞培养。
小鼠胚胎成骨前体细胞MC3T3-E1细胞,
前期用含10%牛血清的α-MEM培养液培养,
传代。选取状态良好的第3代细胞用于后续实验。
三、细胞分组培养
对照组:牛血清(不含外泌体)+ α-MEM
外泌体组:在以上基础上另加入10 mg/L牛血清外泌体。
四、细胞检测
用CCK-8检测细胞增殖,WB检测细胞骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白。
结果显示,24h后,外泌体组细胞增殖明显高于对照组。
同时,促进成骨的蛋白因子,
如骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白的表达水平明显增高。
作者指出:
牛血清外泌体对成骨细胞的增殖起到促进作用,可为临床治疗骨破坏提供新思路。同时,国外的研究表明,使用祛除外泌体的胎牛血清培养细胞,大多数细胞的生长速率均降低,提示血清中的外泌体在细胞生长及存活方面起到一定的作用。
以上可见,体外培养的细胞效果与牛血清关系较大,也与牛血清中的外泌体相关。因此,应注意牛血清的品质。应使用口碑较好的血清(如HAKATA优级血清)