动物组织低温解离试剂盒
试剂名 |
货号 |
规格 |
价格(¥) |
动物组织低温解离试剂盒 |
SC-004 |
6 rxn/盒 |
1500 |
产品概述
“动物组织低温解离试剂盒(6 rxn)”可用于人类、大鼠、小鼠等多种动物组织的细胞悬液制备。 目前市场中多数动物组织解离试剂盒的适用温度为37 ℃,但有文献报道细胞在37 ℃下具有较高的代谢活性,在其解离过程中将不可避免的引发大量应激基因的高水平表达。本试剂盒含有低温活性蛋白水解酶,这是一种丝氨酸内蛋白酶,对天然和变性蛋白具有广泛的特异性,可在低温环境下解离制备单细胞悬液,能够有效的降低应激基因的表达以提高数据结果的准确性和可靠性。
本产品已经预先配置好高质量的酶溶液,不仅使用方便,还可以得到高活性、高得率的单细胞悬液。本产品的组分都经过严格的质量控制和功能验证,在保证单细胞悬液的有效制备的同时,也能保持试验数据的准确性和可靠性,以应用于下游的scRNA-seq(Single-Cell RNA sequencing)实验。
产品组分
本试剂盒(6 rxn)包含四种成份,如下表所示:
名称 |
含量 |
Enzyme 1 |
960 μl*6 |
Buffer 1 |
40 μl*6 |
Buffer 2 |
7 mL |
Buffer 3 |
7 μl |
适用范围
本产品适用于人、大小鼠等多种动物常规组织的单细胞悬液制备。
仅本公司长期验证,适用的组织类型包括:人-肺、人-肠腹膜、小鼠-宫颈肿瘤等。
自备材料
1. 带有能容纳15mL离心管的水平转子的离心机;
2. (低温)恒温混匀仪;
3. 滤网:孔径40μm;
4. EP管:15mL 、50mL;
5. 一次性滴管、无菌剪刀等。
操作步骤
1. 将Enzyme 1、Buffer 1、Buffer 2和Buffer 3提前放置于4℃环境中进行解冻。
2. 取出待处理的组织样本,若是含有保护液的组织则直接置于培养皿中弃去保护液;若是含有冻存液的组织,则先将样本置于37 ℃水浴中2 min后,再弃去冻存液;然后使用DPBS对组织进行洗涤,清除残余的血液等。
*以上均在冰上操作。
3. 经1、2步骤处理过的组织转移至干净的培养皿中,加200 ul的Buffer 2(使组织始终保持湿润状态),用无菌剪刀将组织尽量剪碎至乳糜状。
4. 将乳糜状的组织转移至15mL的EP管中,用移液器吸取400 ul的Buffer 2冲洗培养皿,并将液体转移至15mL的EP管中。
5. 重复步骤4。
6. 在15mL的EP管中加入960ul的Enzyme 1、40ul的Buffer 1和10μL的Buffer 3,用移液器充分吹打混匀后,将此EP管置于6℃恒温混匀仪上,消化30min后进行镜检。
*若细胞总量较少,可适当延长消化时间。
7. 将40μm筛网组装到50mL的EP管上。先加入5mL的DPBS(含1% BSA),用一次性胶管反复吹打混匀,静置5min,待组织沉淀沉于底部,使用1mL移液器吸取上部悬液,滴加到筛网上,使其缓慢过滤。
8. 重复步骤7,将最后得到的约10mL体系转移至15mL的EP管后,500×g、4℃离心10min。
9. 离心结束后,小心吸出全部上清液(尽量不要有残余),然后用500μl的DPBS(含1%BSA)重悬镜检。
*若发现重悬液中存在红细胞或死细胞,采用红细胞裂解液或密度梯度离心法去除。
详细参考步骤请参考试剂盒说明书。
→点击 说明书 ~ 单细胞测序用动物组织低温解离试剂盒.pdf 下载
注意事项
1. 本试剂盒仅适用于科研,不适用于临床检测。
2. 尽量避免试剂的反复冻融,建议到货后分装保存。
3. 整个操作步骤全程冰上进行。
4. 50 mL离心管埋于冰中,将筛网置于管口,过滤时可将筛网稍稍倾斜15°~30°,以避免堵塞。针对组织消化液粘稠的样品,可划动或加预冷培养基反复稀释吹打后,进行两次过筛处理,注意第二次过筛需要缓慢滴加过滤,不能吹打或划动筛网。
5. 离心后,离心管轻拿轻放,不要扰动细胞沉淀。最后管底剩余的少量上清可使用10 μl量程的移液器进行吸取,注意不要接触到沉淀。
*考虑到样本、设备等因素的影响,可适当增大动物组织低温解离的酶解体系并提高其浓度。