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biowind: 测序发现insert片段(转录SiRNA的部分)中多出一个碱基
有公司合成错误的可能。有时还有这种情况:产物中既包含完全正确的序列,也有少量碱基错误的产物。(我实验室曾遇到过该种情况)所以建议你再挑两个克隆去测序。
发表于2004-06-18 09:10
在做表达之前首先要将你的载体彻底的弄明白。你手上的载体是在原核表达涅还是真核表达涅,还是都可以的。然后在分析的时候,转录和表达时两码事情,不能混到一起去。
发表于2012-06-25 16:02
根据您的描述,和您进行一些探讨: 1.您酶切之后跑胶回收时,大小是正确的吗? 2.您所说的大小的问题,如果不是载体自连,那么您提取的质粒应该是什么呢? 3.您成功构建的时候,实验设计和操作方面与其它有不同吗? 4.用NEB的T4DNA连接酶连接时,建议在10ul的反应体系中,插入片段和载体的量控制在1-10ng/ul。
发表于2011-08-23 08:46
做胃癌细胞的RNAi,已构建好siRNA质粒,现在想选择转染试剂,使用过LipofectamineTM 2000和sofast梭华,但转染率不佳,抑制率也很低,原因分析。
发表于2006-12-21 23:05