细胞复苏的-些致命败笔:复苏细胞: 1. 取错细胞; 2. 水浴时间太长; 3. 冰盒内时间太长; 4. 失去耐心。
发表于2004-07-13 22:48
细胞冻存的-些致命败笔: 1. 错误的时机; 2. 细胞太少; 3. 盖子不紧; 4. 单薄的冻存盒; 5. -80度太久; 6. 液氮不足; 7. 取错细胞。
发表于2004-07-13 22:30
冻存和复苏中的小经验: 1.冻存和复苏的时候消化液中不加入EDTA,虽然消化的时间长一点,但有利于细胞的贴壁生长。 2.冻存时取80%融合度时的细胞复苏后的贴壁率和增殖情况更好,切忌待长满瓶底时再冻存,此时细胞已进入平台期,会影响复苏后的状态。 3.细胞悬液离心的速度在800~1 000 rpm比较合适,而且离心管应固定在转子上以免影响实际速度。 4.复苏时最好将冻存液先吸出,然后用含血清培养液逐滴缓慢稀释,以免引起细胞渗透压的剧烈变化。 5.细胞计数根据方法的不同
发表于2009-10-16 23:37
细胞复苏是一简单的试验操作,但操作中有许多需要注意的事项,在实验操作中注意细小问题,才能使复苏后的细胞状态保持良好。针对细胞复苏的操作程序和注意事项,个人做了简单总结。
发表于2009-10-19 17:03
针对细胞复苏,个人的一点经验总结 :1. 可以提前把需要的体积的培养液放到培养瓶里,拧松瓶盖,放到孵箱里半小时到1小时; 2. 为防止冻存管在升温时爆裂等,可以在放入水浴前就实现在超净台里把盖子拧松一下然后再拧上; 3. 水浴温度40℃应该也没问题,但正规的protocol上从来都只说37℃。
发表于2009-10-21 11:58
多年细胞培养者的培养经验: 1. 胎鼠/小鼠的胎龄、周龄最重要,一般胎鼠优于新生鼠,早龄胎鼠优于晚龄胎鼠; 2. B27的成分远远多于N2,对细胞的保护性更好; 3. 鼠的神经球传代基本不用酶,纯机械吹打就可; 4. 培养基换得勤的话,贴壁并不就意味着分化,现在一个趋势大概就是以贴壁取代悬浮吧。
发表于2008-06-24 10:41