JessieQY
发表于 2008-09-05 00:27
1.是不是双酶切后的载体都不会发生自连???
Theoretically....
不过既然你的不长菌,应该不用考虑自连的问题
2.是不是胶回收会破坏酶切位点,载体的回收是不是可以不用胶回收,有没有其他更好的方法,我听说有一种层析拄或是透析袋可以用来代替胶回收.
PCR产物清洁kit就可以用,但两酶切位点中间序列太长不能用。我觉得最好就是一个酶切好就gel回收一下,再另一个酶切,电泳跑时间长一点,让没切开的和切开的分得开一点...这样应该能避免空载了。
3.连接后的连接液,用来跑电泳是不是能看到连接了的片段
想想你连接的mixture里,加进去的载体才那么一点,连成功的更才那么一小点,应该看不到吧。(我没有跑过,你可以试一下看^_^)
建议楼主酶切产物跑电泳看看亮度,光OD值说明不了什么问题