用流式细胞仪做毒鼠强致小白鼠神经细胞凋亡的实验步骤
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jpxq
发表于 2004-10-02 22:02
这是我们这里流式细胞室的一个关于做凋亡的操作步骤和注意事项,你可以参考一下:
流式样品的准备:
DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞时加入3%小牛血清。
1. 培养或分离的细胞约1×10 6,离心沉淀后用0.3 ml含10%小牛血清的PBS悬浮,移入1.5 mlEP管中,加入0.7 ml无水乙醇,置-20摄氏度下固定细胞24小时以上(用本法制定的细胞可以在-20摄氏度下保存一周甚至更长的时间)。
2. 3 000 rpm离心细胞30 s,吸弃上清,用1 mlPBS重悬细胞,再离心洗涤细胞一次,吸弃上清,沉淀细胞用100 ul 1 mg/ml RNase A悬浮,37摄氏度30 min,再加入400 ul 50ug/ml PI,置暗处10 min后上机检测。
3 结果分析:流式报告中可给出G0/G1、S、G2/M各期细胞的百分比,凋亡百分比和细胞倍体。