jacqueslm2001
发表于 2010-11-11 19:08
可能性一:
你的蛋白很黏,因为少量粘附在beads,所以无论有无抗体都能结合beads。
可能性二:
你杂到的就是非特异带。你没给出分子量大小,无法判断是不是轻重链,或者是别的很黏的杂蛋白。而由于你preclear的beads和IP的beads用量不一样(你没有给出具体量,IP所用beads体积,只有preclear的),所以吸附的深浅不同,造成抗体特异结合的假象。
缺乏重要的ctrl-Input和IPed上清:
理论上,在靶蛋白位置蛋白浓度显著降低,前提是你的蛋白可以直接检测出来。
缺正常IgG(或者同源不相干蛋白的IP样品,如CDK2可以采用CDK8等做ctrl,要求来源相同如都是兔抗或者别的,因为CDK2&8结构类似,但前者主要在细胞周期,后者辅助转录,理论上形成的复合体不相干,因此是最佳的negative ctrl),因为IgG组会提示,是否是轻重链或者蛋白太黏。