fly623
发表于 2007-08-10 14:28
冻存细胞的方法:
1. 慢冻法:将细胞经过高浓度甘油40-50%(W/V)溶液处理后,制成的甘油化细胞悬液,在- 80C或- 120℃的特殊冰箱中保存,此时在细胞外液中生成较大的冰块。
2. 速冻法:以低浓度甘油或10~18% DMSO(W/V)快速冻存。将细胞、组织和器官经过低浓度低温保护剂处理以后灌入容器内,置于液氮中(- 197 ℃ )冻存,此时细胞内也有小冰晶形成。
保护剂种类根据其是否透过细胞膜分为两大类:
细胞内(适用于慢速冻存):甘油,DMSO, 葡萄糖,乙二醇、二元醇、三元醇、丙二醇、乙酰胺、甲酰胺、乙醇、甲醇等。
细胞外(适用于快冻保存):乳糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、聚乙二醇、白蛋白、甘露醇、山梨醇、甜乙醇等。
用做电转的酵母感受态细胞要求尽可能去除盐离子,防止电转化杯被击穿,同时可提高效率。所以不能用Cacl2重悬。