coven
发表于 2007-03-24 00:41
一般来说测序在最开始的20个碱基是不太会有好的峰型的,但是如果你几次测序都是这个结果,那么就应该是引物合成的问题了。一般生工默认的合成引物会有三种纯化方式,PAGE胶纯化,过柱子和HPLC,三种的价格是PAGE<柱子<HPLC,一般默认好像是PAGE胶纯化,但这种方式纯化的引物不是很纯,所以适合做RT引物,如果你要做克隆,最好还是选择HPLC纯化的,当然PAGE在不出意外的时候也是可以的。
另外,你的酶切位点与突变的位点不在一个位置,所以由于酶切造成的可能性不是很大,但也不能排除这个原因,我曾经遇到过在酶切位点碱基变了,后来重新切了载体,就好了。